【Serumwerk】多甲病毒科（Polymethylviridae）纯化

浏览量：108

Serumwerk Bernburg AG 1893 OptiPrep™

小白求助前辈指路

多甲病毒科纯化不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

辛德毕斯病毒（Sindbis virus）纯化

在连续的碘克沙醇梯度中分析了辛德毕斯病毒核衣壳。在含4% Triton X100的低渗缓冲液中裂解细胞后，将核后上清液加载到含0.1% Triton X100、100 mM NaCl、1 mM EDTA和50 mM Tris-HCl的连续等渗0-30% (w/v)碘克沙醇梯度上，pH值7.4，并以约120,000 g离心2.5小时（约14 ml的试管）。核衣壳在距离梯度顶部约2 / 3的部分达到峰值。碘克沙醇梯度也能溶解两种病毒，其中较密集的病毒感染性更强。

Snyder等也报道了在含1 mM EDTA的标准缓冲盐水中使用0 - 30% (w/v)碘克沙醇梯度);在梯度上装入粗病毒悬液并以约125,000 g离心2 h。使用该梯度纯化辛德毕斯病毒和基孔肯雅病毒。

委内瑞拉马脑炎病毒（Venezuelan equine encephalitis virus）纯化

在分离前病毒核衣壳之前，通过将115,000 g的25% (w/v)碘克沙醇垫颗粒化3 h浓缩病毒。在相同的离心条件下，在10-60% (w/v)的碘克沙醇梯度中纯化病毒前核衣壳；所有操作均在4℃下实施。

由于开发减毒HIV疫苗存在安全问题，Jurgens等研究了使用来自委内瑞拉马脑炎病毒的基因组，该基因组经过修饰，可表达编码HIV Gag和Env蛋白的SHIV89.6P基因。使用碘克沙醇缓冲垫和后续梯度的基本相同的方法；唯一的显著差异是梯度的密度范围稍窄(10-50% w/v碘克沙醇)。

基孔肯雅病毒（Chikungunya virus）纯化

Akahata和Nabel研究了E2蛋白对基孔肯雅病毒样颗粒产生的调节作用，使用的是最初用于研究HIV嗜性的自我产生的碘克沙醇梯度。将颗粒的粗悬浮液调整为30% (w/v)碘克沙醇，并在Beckman VTi50垂直转子中以160,000 gav (45,000 rpm)离心6小时，产生1.01 ~ 1.22 g/ml的梯度。对基孔肯雅病毒的这些研究表明，衣壳蛋白条带的密度显著高于病毒样颗粒。

麻疹病毒（measles virus)纯化

PEG-颗粒风疹病毒已在0-54% (w/v)碘克沙醇梯度上纯化(含20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 120 mM NaCl, 1 mM EDTA)，在175,000 g离心2 h；作者证明了风疹病毒结构蛋白的组织与甲病毒科其他病毒的结构蛋白的显著差异。

相关产品推荐