【Serumwerk】黄病毒科（Flaviviridae）纯化

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Serumwerk Bernburg AG 1893 OptiPrep™

小白求助前辈指路

黄病毒科纯化不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

鼠疫病毒（牛腹泻病毒）纯化

Plague virus （Bovine diarrhea virus）

通过间断碘克沙醇梯度浮选纯化病毒。将来自细胞培养物的培养基在4,000 g下澄清30 min，并且将上清液在125,000 g下离心4h，以浓缩成病毒颗粒。将后者重悬于0.35 ml PBS中并与等体积的OptiPrep™(碘克沙醇终浓度= 30% w/v)混合。将25%、20%、15%、10%和5% (w/v)碘克沙醇(OptiPrep™用PBS稀释)分层置于贝克曼SW60Ti摆动桶转子的管中(4 ml管)。在168000 g离心4 h后，梯度可能接近线性;病毒在约16.5% (w/v)碘克沙醇下条带。另一种方法是使用顶部负载的不连续梯度，其中包含150000 g的10%、22%、24%和26% (w/v)碘克沙醇各2 ml，作用2小时；病毒在22%/24%界面条带。

波加卡热病毒纯化

Bogaka fever virus

将来自细胞培养上清液的病毒通过72,000 g 20% (w/v)蔗糖造粒浓缩5 h。将重悬的颗粒在10-40% (w/v)碘克沙醇梯度上分层，并在164,000 g离心2 h。通过72,000 g造粒5 h从梯度组分(用缓冲液稀释后)中回收病毒。Smith等和Vancini等使用了两轮离心，同样是在顶部负载12%和35% (w/v)碘克沙醇的双层梯度中;第一次离心是在约105000g处理8-16小时，第二次约150000g处理3小时。离心法的一个重要目的是浓缩病毒，并将病毒与牛血清白蛋白分离。

感染培养细胞的核后上清液以6%、18%、30%和48% (w/v)碘克沙醇的不连续梯度分离，在大约浓度下离心过夜。100,000 gav在登革病毒复制复合物研究中的应用梯度显示，在感染细胞中发生的脂肪酸合成增加与膜区室相关，膜区室也包含大部分登革热RNA。Zaitseva等使用15%、20%、25%、40% (w/v)的碘克沙醇梯度，在约340,000 g离心1.5 h，将负载亲脂性荧光蛋白(在20-25%界面条带)的登革病毒部分与任何未掺入的蛋白分离。病毒在5% (w/v)碘克沙醇中分层，超过10%，20%，25%和35% (w/v)碘克沙醇在24万g离心1.5小时(病毒在20-25%界面条带。

西尼罗病毒纯化

West Nile virus

将病毒颗粒在48,000 g下浓缩15小时，然后将颗粒重新悬浮在缓冲盐水(或培养基)中，在15-55% (w/v)的碘克沙醇梯度上分层，并在100,000 g下离心18小时。所用的相对较低的g力是否反映了该病毒对离心力的特别敏感性尚不清楚。

黄热病病毒纯化

Yellow fever virus

在约离心的5-40% (w/v)碘克沙醇梯度上纯化黄热病毒并进行分析。175,000 gav作用7小时。梯度被描述为“速率区域”，但在这些离心条件下，它更有可能是浮力密度分离。无论分离的性质如何，Patkar et al所做的一个非常有趣的观察是，与野生型相比，衣壳蛋白上的一些氨基酸缺失序列导致了显带位置的显著变化。

戊型肝炎病毒纯化

Hepatitis E virus

8-40% (w/v)、6-56% (w/v)和0-40% (w/v)的碘克沙醇连续梯度已被用于比较从单层感染细胞释放到培养基中的病毒与从细胞裂解物或感染动物的血清或粪便中释放的病毒的性质。碘克沙醇梯度显示，血浆或培养液中的病毒有包膜，密度在1.08 ~ 1.11 g/ml，而细胞裂解物和粪便中的病毒密度较高(1.20 ~ 1.25 g/ml)，呈无包膜形态。

甲型肝炎病毒（小核糖核酸病毒科）纯化

Hepatitis A Virus (picornaviridae)

Feng等人首先设计了一个梯度(8-40% w/v碘克沙醇，在141,000 g离心48小时)，以区分两种甲型肝炎病毒：低密度(1.06- 1.10 g/ml)和高密度(1.22-1.28 g/ml)。低密度型为包络型，高密度型为非包络型;Hofer将低密度人群确定为“类外泌体”，并指出与高密度人群不同，它不包含病毒衣壳。Kapsch等引入：15-50%碘克沙醇梯度在141,000 g离心48 h。

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