【Serumwerk】兔出血症病毒（Rabbit hemorrhagic virus）纯化
兔出血症病毒纯化不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
溶液制备
A. OptiPrep™
B. 10x磷酸盐缓冲盐水，含10 mM MgCl2和25 mM KCl (10xPBS-MK)
C. 含1 mM MgCl2和2.5 mM KCl的磷酸盐缓冲盐水(PBS-MK)
D. 2 M氯化钠溶液
E. 54% (w/v)碘克沙醇PBS-MK工作液：将9体积的OptiPrep™与1体积的溶液B混合。
试验方法
1．准备以下梯度溶液:
15% (w/v)碘克沙醇含1 M NaCl的PBS-MK溶液:1.5体积的溶液E + 2.7体积的溶液D + 1.2体积的溶液C。
25% (w/v)碘克沙醇PBS-MK: 2.5体积的溶液E + 2.9体积的溶液C
40% (w/v)碘克沙醇PBS-MK: 4.0体积的溶液E + 1.4体积的溶液C。
2．使用Dounce匀浆器在PBS中产生肝匀浆并以900 g离心10分钟。
3．将核后上清液以4000 g离心20分钟，然后通过0.2 μm过滤器进行澄清。
4．将澄清的上清液(2.5 ml)依次(使用注射器和金属套管)转移到用于选定转子和底层的管道中，分别加入2.25 ml、1.5 ml、1.25 ml和1.25 ml的15%、25%、40%和54%碘克沙醇溶液。
5．35万gav离心1小时20分钟，使用缓慢加速到2000转/分。
6．病毒带要么在40%碘克沙醇层内，要么在其下层界面处。
方法注释
1．对于较小或较大的体积管，按比例缩小或扩大所有体积。
2．可在交替的梯度层中加入酚红(0.01µg/ml)，以增强层的视觉识别。碘克沙醇的扩散和350,000 g离心过程中碘克沙醇本身的一些沉降会使界面变得不那么明显。
3．Teixeira等人在此步骤后冻结了材料。
4．15% (w/v)碘克沙醇缓冲液也被用于浓缩这种病毒。
5．如果转子不能达到350,000 g，可能需要按比例增加离心时间。
6．Teixeira等得出结论，与使用蔗糖或CsCl梯度的早期操作相比，单次短时间碘克沙醇梯度离心法是首选的方法。该方法不仅操作迅速，而且兔出血性疾病病毒的传染性和纯度也优于其他方法。
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