【Serumwerk】诺瓦克病毒（Norwalk virus）纯化
诺瓦克病毒纯化不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
溶液制备
A. OptiPrep™
B. 稀释剂：磷酸盐缓冲盐水
试验方法
1．从细胞单层中获取培养基。
2．通过700 g离心15 min澄清培养基。
3．通过20000 g离心30 min完成澄清。
4．以120,000 g将该粒子颗粒化2 h。
5．将颗粒悬浮于约2.5 ml溶液B中，与OptiPrep™混合，产生30% (w/v)的最终碘克沙醇浓度。
6．将悬浮液转移到NVT65.2转子或其他合适的垂直或近垂直转子的管道中，并在大约350,000 gav于4℃下维持3 h。
7．在离心结束使用控制减速程序或关闭制动低于2000转。
8．在半月板上进行等体积的抽吸(15 ~ 20次，与梯度体积无关)，去除梯度。位于梯度顶部1 / 3的类病毒颗粒带。
方法注释
1．在该方案的第5步中，将含有病毒样颗粒的悬浮液与等体积的OptiPrep™简单混合，这意味着缓冲液浓度将降低50%。如果认为不可接受，则首先将5.4体积的OptiPrep™与0.6体积的10倍PBS混合，产生54% (w/v)碘克沙醇的工作溶液。
2．理想的浓缩病毒的方法是将病毒沉淀在碘克沙醇的致密垫层上，而不是将其制成颗粒，这样会导致丧失传染性。当后续纯化处于自生成梯度时，该方法非常容易使用。将含有2-3 ml OptiPrep™的澄清的含病毒溶液置于摇摆桶转子的底层，以120,000 g的浓度离心2小时。除去除与OptiPrep™缓冲液体积相等外的所有上清液，与后者充分混合，然后转移到用于接近垂直或垂直转子的管中。
3．如果使用较大的体积，可能需要增加离心时间。
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