【Serumwerk】虹彩病毒科（Iridoviridae）纯化
虹彩病毒科纯化不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
溶液制备
A. OptiPrep™
B. 细胞裂解缓冲液:0.1 M NaCl, 5 mM EDTA, 50 mM Tris-HCl, pH 7.4
C. OptiPrep™稀释缓冲液:7.4% (w/v)蔗糖，4 mM EDTA, 40 mM Tris-HCl, pH 7.4
D. 梯度原液稀释缓冲液:7.4% (w/v)蔗糖，2 mM EDTA, 20 mM Tris-HCl, pH 7.4
试验方法
1.用Dounce匀浆器或类似装置将细胞匀浆，释放病毒，澄清，1500 g离心20 min，去除细胞碎片。
2．用等体积的溶液C稀释OptiPrep™，产生等量30% (w/v)碘克沙醇溶液，含有2 mM EDTA和20 mM Tris-HCl, pH 7.4;然后用溶液D将该原液稀释以产生5%、10%和20% (w/v)碘克沙醇溶液。
3．在所选的摆动桶转子层中，等量的5%、10%、20%和30% (w/v)碘克沙醇并将粗制病毒悬液置于其顶部。
4．55,000 g离心1小时。病毒应在20%/30%碘克沙醇界面条带。
5．从病毒带上方去除溶液，然后使用注射器和金属套管吸取病毒，尽可能少地吸取30% (w/v)溶液。
6．用25% (w/v)碘克沙醇稀释病毒悬液(梯度原液用溶液D稀释)，转移到用于所选垂直或近垂直转子的管道中，并以约350,000 g离心2-3小时。
7．收集可见的病毒带。
方法注释
1．生产30% (w/v)碘克沙醇的原液，含有2mM EDTA和20 mM Tris-HCl, pH值7.4，以确保梯度溶液不仅是所有的梯度溶液是近似等渗，但它们都含有2 mM EDTA和20 mM Tris。如果认为这是不必要的，则只需用溶液D稀释OptiPrep™。
2.Wu等人使用贝克曼SW41转子产生一个自生成的梯度，并在87,000 g浓度下过夜离心。最常见的情况是在更高的g力下使用更短的时间。在摆动斗转子中，在87000克夜间形成的梯度类型尚未被研究。操作员必须在这两种备选方案中进行选择。
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