【Serumwerk】疱疹病毒科（Herpesviridae）纯化
疱疹病毒科纯化不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
溶液制备
A. OptiPrep™
B. 稀释剂：0.85% (w/v) NaCl, 60 mM Hepes-NaOH, pH 7.4
C. 50%碘克沙醇(ρ = 1.272 g/ml)工作液：5体积溶液A与1体积溶液B混合。
D. HEPES缓冲盐水：0.85% NaCl (w/v)，10 mM HEPES-NaOH, pH 7.4。
试验方法
1．通过1000 g离心10 min澄清病毒悬液。
2．将已知体积的上清液转移到适用于摆动桶转子的管道中，并在底部放置小体积(2-4 ml)溶液C。
3．以160,000 gav离心1小时，在工作溶液界面上快速抑制病毒。
4．除去除与缓冲液体积相等外的所有上清液，混合管中的剩余内容物。此将产生存于25% (w/v)碘克沙醇中的浓缩病毒悬液。
5．将悬浊液转移到适合垂直或接近垂直转子的管道中，使病毒在碘克沙醇的自生成梯度中条带。
6．任何未填充的管应加满并与25% (w/v)碘克沙醇混合(混合等体积的溶液C和D)。
7．在350,000 gav离心2.5小时，在离心结束时使用受控减速程序或在2000 rpm以下关闭制动器。
8．要么用注射器和金属套管获取病毒带，要么用导管穿刺卸载整个梯度，或其他合适的方法。在描述的离心条件下，疱疹病毒将带在管的底部三分之一。
方法注释
1．实际体积取决于病毒液的总体积和所用管的体积。例如:每管约15毫升上清液，使用1-2毫升缓冲液，35 ml使用2-4 ml。
2．由于接近梯度底部的病毒带和污染膜较轻，从底部收集是首选的方法。
3．大约2.5-3.5小时后，产生的梯度向顶部相对较浅，在密度较大的区域逐渐变陡。它能有效地使病毒在试管底部附近急剧凝集，而任何膜性污染条带的密度较低。在较短的时间内(例如1.5 h)，病毒显带区域的梯度更呈s形且更浅；这允许病毒可能被细分。感染性特征中所见的肩关节在较短时间内变得更清楚。这种次分馏的意义尚未得到研究。
4．从碘克沙醇梯度收集的疱疹病毒(和星状病毒)已被用于重新感染细胞，而无需去除培养基。初步分析表明，回收率达到90%以上。
5．该方法可以扩大规模，以使用较大的垂直转子，如贝克曼VTi50，但较长的沉降路径和较低的最大RCF意味着需要更长的离心时间。
人疱疹病毒4型（Epstein-Barr virus）纯化
在50% (w/v)的碘克沙醇屏障上浓缩病毒，然后由25%碘克沙醇(350,000 g作用2.4小时)形成自生成梯度，以纯化和分析EB病毒。
杆状病毒群（Baculovirus）纯化
将病毒离心至50% (w/v)碘克沙醇垫层(80,000 g 1 h)后，去除病毒带上方的液体，并在残留垫层中收集病毒，将碘克沙醇浓度调整至25% (w/v)，病毒在Beckman NVT65(近垂直转子)中以35万g的浓度条带3 h。
核衣壳来自1% NP-40(在含2 mM EDTA的缓冲盐水中)处理过的柱状病毒悬液(6 ml)，可以在双层碘克沙醇梯度上分离(3 ml, 25% w/v和50% w/v)，以16,000 g离心3 h。
相关产品推荐
其他细胞品类
别划走，精彩继续
长按识别
添加一对一专属技术支持
扫码进群
咨询详细产品信息
点在看，传递你的品味
