【Serumwerk】人活精子（Viable human spermatozoa）纯化
人活精子纯化不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
浮选法
溶液制备
A. OptiPrep™（使用前轻轻摇动瓶子）
B. 改良型人输卵管液（mHTF）
试验方法
1.用mHTF稀释OptiPrep™以获得ρ = 1.15和1.05 g/ml的溶液，分别约为w/v碘克沙醇的27.5%和8%。
2.将液化精液与OptiPrep™(分别为4体积+ 6.5体积)混合以提高其密度至约ρ = 1.17 g/ml。
3.在15 ml管中分别从3 ml ρ = 1.15和1.05 g/ml溶液中制备不连续梯度。
4.将密集的精液悬浮液在梯度下面分层，1500 g离心40分钟。
5.从1.05/1.15 g/ml界面收集形态正常的活精子细胞。
6.稀释5体积的mHTF并通过500 g离心15 min收集细胞。
沉淀法
试验方法
1. 用mHTF稀释OptiPrep™以获得= 1.09 g/ml和1.132 g/ml的溶液(分别为约16%和24%，w/v碘克沙醇)。
2. 将液化的射精层放在两个密度屏障的等体积(推荐1ml)上。
3. 在室温下400 g离心20 min。
4.去除含有异常细胞的上层，从下层获取运动的正常细胞。稀释后收集细胞。
方法注释
1. 这些溶液的渗透压摩尔浓度约为280 mOsm。
2. 配制密度溶液所需的OptiPrep™和培养基的体积将随培养基的密度而变化。如果稀释剂的密度与mHTF的密度显著不同，则可能需要调整产生特定密度所需的OptiPrep和稀释剂的体积。
3. Smith等人报道，78%的活动精子细胞和99%的形态正常精子细胞在界面带中被恢复，该方法是Percoll的一种合适的无毒替代方法。
4. Harrison报告这两种密度对活精子的回收率最好(30-34%)，但层数18%和27% (w/v)碘克沙醇，相当于1.100和1.148 g/ml的密度几乎同样有效。具有高达约ρ = 1.16 g/ml密度的较低层应仍允许非活细胞成球并且此较高密度可改进活细胞的恢复。建议的上层密度也可能需要调制以适应操作者的要求。该层的目的是将沉淀在1.09/1.132 g/ml界面的活精子细胞与样品在1.09 g/ml界面或1.09 g/ml层内的异常细胞分离。
5. Van den Bergh等使用了7.5%、15%和30% (w/v)碘克沙醇的三层梯度。
6. Kaftani等人比较了10.5% (w/v)和21% (w/v)碘克沙醇梯度。相当于1.062和1.117 g/ml)，发现两种梯度介质在运动精子百分比或形态恢复方面没有显著差异。
7. 最近，Araki等人使用16%和24% (w/v)碘克沙醇的两层梯度来纯化人类精子。
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