【Serumwerk】Optiprep分离膜的使用说明
Optiprep分离膜不会使用、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
浮选法分离心肌质膜
（Myocardial plasma membrane）
使用碘二醇梯度，质膜(PM)部分的分离通常与其他亚细胞膜的纯化同时实现。这些方法大多适用于培养细胞和肝脏等软组织，但肌肉等组织通常需要定制方法。然而，其他一些碘二醇梯度可能适用于肌肉组织。
将粗质膜悬浮液调整到刚好大于心肌质膜的密度(1.049 g/ml，相当于5% w/v碘二醇)，这样在离心过程中，质膜就会浮到液体的顶部。将样品分层在15% (w/v)碘二沙醇(1.103 g/ml)的小缓冲垫上，离心16小时，由于碘二沙醇的扩散和碘二沙醇分子靠近管底的一些沉淀，将形成一个浅梯度。因此，这不仅可以分离质膜，还可以部分分离一些较致密的膜室。浮选通常比沉淀法能更好地回收和/或分离粗馏分中密度最小的组分。在浮选形式中不能发生梯度超载(样品/梯度界面的不稳定性)。
连续梯度分离质膜
（Plasma membrane）
该方法提出了两种策略，分别采用较长的离心时间格式。Dunphy等人和Woods等人将核后分数应用于连续的碘二醇梯度，而Bivona等人最初在加载到连续的碘二醇梯度之前使用不连续的蔗糖梯度来提供粗质膜。由于Bivona等人使用了主要含有PM和ER的部分，他们能够使用浅的低密度梯度(5-20%（w/v）碘二醇。然而，总的核后部分也包含细胞器，如线粒体和过氧化物酶体，它们比PM和内质网的小泡沉积得更快，可能扰乱这种浅的低密度梯度。因此，Dunphy等人和Woods等人选择了更陡峭的梯度。
PM馏分的超声波法对微泡（Microvesicle）无洗涤剂纯化
这是一种不含洗涤剂的策略，由Smart等人首次描述，用于从人成纤维细胞中分离小泡。后来由Babitt等人对其进行了修改，随后以原始形式或修改后的形式(没有任何进一步的改编)应用于广泛的其他细胞类型以及脑组织、甲状旁腺和鸡肠粘膜上皮的膜组分。
抗洗涤剂膜(DRMs)脂筏的纯化
OptiPrep™方法现在被公认为金标准方法。大多数已发表的方法使用浮选策略，其中含有洗涤剂的样品，通常调整为35%或40%的碘二醇，并覆盖各种密度的溶液。有时这些只包括裂解缓冲液和另一层30%的碘二醇。在其他情况下，梯度更广泛，由几层(例如30%、25%和20%碘二醇)形成。离心速度和时间从25万g 2小时到14万g 20小时不等。无论梯度格式或离心条件如何，脂筏通常漂浮到(或接近)最上面的界面。通常使用的洗涤剂是Triton X100，但有时也使用CHAPS或Brij。
相关产品推荐
其他细胞品类
别划走，精彩继续
长按识别
添加一对一专属技术支持
扫码进群
咨询详细产品信息
点在看，传递你的品味
