【Serumwerk】在预形成的梯度中的蛋白质大小的分析
蛋白质分析不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
1.Large等人使用0.3M, 0.5M, 0.7M蔗糖和36% (w/v)碘克沙醇的不连续梯度从火山盐中分离CCTⅡ型伴侣蛋白。
2. 在10-30% (w/v)碘克沙醇梯度(210,000 g作用1 h)上对唾液黏蛋白进行大小分馏——根据沉降率(约为210,000 g作用1 h)定义了三种类型。1.10、1.13和1.17 g/ml)。Kesimer等人进一步研究了最致密的粒状形式。
3.Shutova等分析了碘克沙醇梯度下大鼠胚胎成纤维细胞的非肌性肌球蛋白II (NM-II)。在含0.5% Triton-X100的150 mM KCl缓冲液中裂解细胞后，将裂解产物在约20℃离心。150000 g处理15 min以去除去污剂不溶性部分。将裂解产物在50%、25%、12%和6% (w/v) 碘克沙醇的不连续梯度上分层，并以80,000 rpm离心60 min，以分离这种肌球蛋白的单体版本和聚合版本。更重要的是，为了更广泛地使用这种梯度来研究蛋白质的分子质量，作者还表明，梯度可分解m.t wt。标志蛋白醛缩酶、过氧化氢酶和铁蛋白(分别为7S、11S和16S)。Lehtimäki等也使用相同的梯度来研究NM-II的折叠和双极丝的组装。
4. Vijayakumar等人使用5-40% (w/v)的碘克沙醇梯度在100,000 g离心3小时来研究hensin的寡聚化;使用以下标记物校准梯度:γ-球蛋白(158 kDa)、过氧化氢酶(232 kDa)和甲状腺球蛋白(670 kDa)。
5. 线性1-12% (w/v)碘克沙醇梯度被用于研究副黏病毒复制基因工程融合蛋白的寡聚状态。
6. 使用培养上清液和细胞裂解液，在超滤浓缩步骤后，以约124,000 g的10-40% (w/v)碘克沙醇梯度纯化来自丙型肝炎病毒感染细胞的载脂蛋白B和E 16 h。载脂蛋白(a)可抑制病毒进入肝癌细胞。
7. 碘克沙醇梯度能够促进从卵巢肿瘤患者或良性肿瘤患者(或对照组)的血浆样本中检测HERV-K-ENV蛋白。这在卵巢肿瘤患者中更为明显，而HERV-K逆转录酶在两组患者中同样升高。
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