【Serumwerk】核酸（Nucleic acid）分离

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Serumwerk Bernburg AG 1893 OptiPrep™

小白求助前辈指路

核酸分离不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

溶液制备

制备含有0.3 M KCl, 2 mM MgCl₂, 20 mM HEPES-KOH, pH 7.4的溶液将是稀释5体积的OptiPrep™与1体积的1.8 M KCl, 12 mM MgCl₂,120 mM HEPES-KOH, pH 7.4，因此可达到的最高碘克沙醇浓度将是50% (w/v)。

丙型肝炎病毒RNA

在碘克沙醇梯度中分析了从受感染的人肝癌细胞释放的丙型肝炎病毒(HCV)。首先将含RNA的材料浓缩在含有40% (w/v)碘克沙醇的缓冲液中，加入Tris-缓冲液0.85% NaCl, 52,000 g保存6 h。以0-28%的碘克沙醇梯度覆盖并在110,000 g离心16 h。含有颗粒的特征性富含脂质RNA条带为1.04-1/06 g/ml，而残留RNA条带为1.13 g/ml。使用自身生成的碘克沙醇梯度，也观察到HCV感染细胞的低密度脂质相关RNA和高密度RNA大致类似的二分法。在这种情况下，将细胞匀浆简单地调整为约25% (w/v)碘克沙醇，0.084 M蔗糖，4.8 mM EDTA, 20 mM Tris-HCl, pH 7.4，在165,000 g离心24 h。

微RNA

Detzer分析了正常和NaAsO₂应激ECV 304细胞的siRNA和RNAi相关蛋白；将核后上清液置于10-25% (w/v)碘克沙醇梯度上，加入250mM蔗糖，140mM NaCl, 1mM EDTA, 20mM Tris-HCl, pH 8.0, 2mM DTT, 48000 g离心18 h。

RNA颗粒

Fritzsche等人设计了一个梯度系统来纯化将RNA转运到树突的神经元颗粒。可溶性部分(20000 g/15 min上清液)在15-30%碘克沙醇梯度上分层，并在280,000 g离心2小时。颗粒在梯度的中间条带，并与保持在梯度顶部附近的可溶性蛋白分离良好。这种方法也被Donlin-Asp等用于研究脊髓性肌萎缩患者的成纤维核糖核蛋白。

siRNA载体

通过7.5%的siRNA在30,000 g下沉积30 min，从siRNA中获得多余的纳米凝胶表面活性剂的分离。

核糖体和非核糖体RNA的分离

在一项对肾近端小管细胞应激复合物的研究中，细胞提取物（调整为2.5%碘二醇）在5、10、15、10、20、20、25、50和54%碘二醇（155,000 g作用3 h）的梯度上进行分析。细胞质蛋白位于梯度的顶部，非核糖体RNA位于2.5-15%，而核糖体RNA带在20-54%的区域。

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