【Serumwerk】肝和胰腺星状细胞（Stellate cells from liver and pancreas）分离
实质细胞通常是通过使用组织灌注系统的肝胶原酶消化来制备。然后借由在50 g下进行1-4分钟差异造粒将该等细胞与非实质细胞分离。
所需溶液准备
（胰腺细胞悬液的制备采用更传统的方法，即在37℃下用链霉蛋白酶和胶原酶消化解剖和精细切碎的组织30分钟，然后通过不锈钢网上的尼龙过滤。）
通常将细胞从粗悬液中造粒并且可能在密度屏障分离之前洗涤1或2次以去除任何残留的酶和/或内毒素。还可以加入脱氧核糖核酸酶I来降解从受损细胞释放的任何DNA，否则将导致细胞聚集。细胞悬浮在等渗盐溶液中；通用培养基如Hank’s平衡盐溶液(HBSS)，可在需要时补充Ca2+，或定制培养基:Gey平衡盐溶液(GBSS)常规用于肝细胞。
A. Gey’s平衡盐溶液（GBSS）或Hank’s平衡盐溶液（含或不含Ca2+/Mg2+）。
B. OptiPrep™（使用前轻轻摇瓶）
C. 碘二醇（40%（w/v））工作溶液：混合4体积溶液B和2体积溶液A。
试验方法
在4℃的温度下进行所有的操作。
（一）
1．将溶液C与溶液A混合，使碘克沙醇终浓度为8.0-11.5% (w/v)碘克沙醇溶液(ρ = 1.050-1.065 g/ml)，用此悬浮最终洗涤细胞颗粒。或者将细胞悬浮于溶液A中并与溶液C混合以产生8.0-11.5%碘克沙醇悬浮液。
2．将10-20 ml转移到离心管中，并将8-10 ml溶液A铺在顶部。
3．1400 g离心15-20 min；允许转子在没有刹车的情况下减速。
4．收集在溶液A和样品之间的界面处条带的单元。
（二）
1．将溶液C与溶液A混合，使碘克沙醇的最终浓度为15% (w/v)碘克沙醇溶液(ρ = 1.084 g/ml)，并使用此悬浮最终洗涤的细胞颗粒。
2．用溶液A稀释溶液C，得到含8.0-11.5% (w/v)碘克沙醇(ρ= 1.050-1.065 g/ml)的溶液。
3．将5-10 ml该溶液覆盖于相同体积的细胞悬液（15%碘克沙醇中）上；然后将约5 ml溶液A涂于顶部。
4．1400 g离心15-20 min;允许转子在没有刹车的情况下减速。
5．收集细胞，在溶液A和低密度屏障之间的界面条带。
方法注释
1．可使用与细胞相容的任何培养基。
2．使用任何浓度的碘克沙醇，提供最佳的回收率和纯度的星状细胞。
3．或者使用注射器和金属套管将细胞悬浮液分层置于溶液A下。
4．使用制动器引起涡流形成液体和混合内容。
5．这个细胞层的实际密度并不是特别重要，只要它的密度足以支持低密度的溶液。
6．按照Brouwer等的双层法，将细胞悬液置于低密度层。
7．或者使用注射器和金属套管将细胞悬浮液分层置于较低密度溶液下。
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