【Serumwerk】刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）的纯化
刚地弓形虫纯化不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
溶液制备
A. OptiPrep™（使用前轻轻摇动）
B. 磷酸盐缓冲盐水（PBS）
用溶液B稀释OptiPrep™(60% w/v碘克沙醇)，制成10%和30% 或 10%， 20%和30% (w/v)碘克沙醇溶液。
试验方法
1．在Vero细胞、CHO细胞或HFF中培养弓形虫。
2．使用双腔梯度发生器或Gradient Master™从等体积的10%和30% 碘克沙醇中制备连续梯度(15 ml管中总容积约8 ml或50 ml管中总容积约30 ml)。如果这两种装置均不可用，则从等体积的10%、20%和30% 碘克沙醇制备不连续梯度;小心地将管旋转到水平位置，并通过扩散形成梯度。
3．在梯度生产过程中，从细胞培养上清中收获寄生虫，并通过27号注射器针头将悬液传递两次，以破坏任何污染的细胞。
4．用C溶液洗涤弓形虫3次;每次以1000 g将悬浮液离心10 min。
5．最后将颗粒悬浮于10% 碘克沙醇中并在连续梯度之上分层。
6．大约在2000 g离心。30分钟。
7．收集1.09-1.11 g/ml的弓形虫(刚好在梯度的一半以上)。
方法注释
1. 所有碘克沙醇溶液与哺乳动物细胞等渗。
2. 在室温下，不连续梯度的扩散不应超过约1小时。如果管子保持垂直，整个过程将需要几个小时。由于弓形虫条带密度略低于20% (w/v)碘克沙醇，在纯化过程中不连续梯度可能是有效的，但尚未经过测试。
3. 颗粒上和颗粒中残留缓冲液将稀释梯度介质以允许在10-30%梯度上分层。如果在样品分层中遇到困难，用约0.2 ml溶液C稀释样品。
4. 不要用制动器来减速转子。
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