【Serumwerk】疟疾寄生虫(恶性疟原虫、柏氏疟原虫、间日疟原虫和约氏疟原虫)malarial parasites的纯化
疟疾寄生虫(恶性疟原虫、柏氏疟原虫、间日疟原虫和约氏疟原虫)纯化不成功、实验做不出来怎么办?新手小白迫切求助,希望各位前辈在文章下方留言,分享自己的经验,为小白们答疑解惑!
疟疾寄生虫(恶性疟原虫、柏氏疟原虫、间日疟原虫和约氏疟原虫)malarial parasites (Plasmodium falciparum, Plasmodium berghei, Plasmodium vivax, and Plasmodium yoelii)的纯化
溶液制备
NycodenzⓇ溶液现在必须通过在合适的介质中溶解NycodenzⓇ粉末来制备。
我们建议制作30% (w/v) NycodenzⓇ原液。向50 ml水(在60℃下轻轻搅拌)缓慢添加30 g NycodenzⓇ直至完全溶解。使溶液冷却至室温;加入10 ml 100 mM Tris, HEPES或Tricine;调节pH值至7.0-7.5,加水达100毫升。
如果需要储存,此原液可经过过滤灭菌。当用平衡盐溶液、缓冲盐溶液或培养基稀释,以产生较低密度的溶液时,这些溶液与哺乳动物血浆等渗。
试验方法
碘克沙醇作为60% (w/v)溶液(OptiPrep™)的可用性使梯度溶液制备比使用NycodenzⓇ更容易。碘克沙醇和NycodenzⓇ溶液的相同% (w/v)浓度有几乎相同的密度,但溶液NycodenzⓇ是高渗超过1.15 g/ml,相比之下,碘克沙醇可以在所有密度等渗。
最近,恶性疟原虫和伯氏疟原虫已在碘克沙醇梯度中纯化。Cha等人描述了15.4%和10.2%碘克沙醇的两层梯度的使用,在16500 g离心10分钟。微生物在较低密度层的顶部条带。
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