【Serumwerk】白细胞（Leukocyte fractions）分离
白细胞分离不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
溶液制备
A. OptiPrep™（使用前轻轻摇瓶）或NycodenzⓇ粉末
B. 稀释剂（OptiPrep™）：0.85%（w/v）氯化钠，6 mM氯化钾，10 mM HEPES-NaOH，pH 7.4
C. 稀释剂（NycodenzⓇ）：6 mM氯化钾，10 mM HEPES-NaOH，pH 7.4
D. 高渗稀释液：3 mM氯化钾，0.3mM Na2-EDTA，0.3mM氯化钙，1.245 M氯化钠，5 mM HEPES-NaOH ，pH 7.4。
E. 灌洗液：克雷布斯林格氏盐溶液，用25 mM HEPES缓冲至pH值7.4，含1%（w/v）牛血清白蛋白。
试验方法
1. OptiPrep™：用5.4 ml溶液B稀释4.6 ml溶液A，得到约1.15 g/ml的工作液。
2. NycodenzⓇ制作100毫升的1.15 g/ml工作溶液，放置大约。将50 ml溶液C存于150 ml烧杯中，置于加热的磁力搅拌器上，设置为约。50℃并以少量添加27.6 g NycodenzⓇ直至溶解。让溶液冷却到室温，然后用水配制多达100毫升。必要时进行过滤消毒。
3. 将所选工作液分别与溶液D和水按0.7:0.08:0.22混合，组成1.106 g/ml和400 mOsm密度屏障;构成1.091 g/ml和325 mOsm密度屏障的使用比为0.6:0.06:0.34。
4. 收集腹膜细胞于溶液E中，于20℃300 g离心10 min;然后用溶液E洗涤细胞一次，将细胞重新悬浮于此培养基中至约107个/ml。
5. 用3 ml密度屏障使7 ml细胞悬液下层并在700 g下在20℃离心20 min。单核细胞和中性粒细胞穿过密度屏障分离。
方法注释
1. 从OptiPrep™配制1.15 g/ml工作溶液比从NycodenzⓇ粉末更容易，两种溶液将具有相同的物理性质。分离结果有差异的可能性很小，但应强调的是OptiPrep™的使用尚未经过验证。
2. NycoprepⓇ1.15含有3 mM KCl, 5 mM Tris-HCl, pH 7.5和0.3 mM can2edta。纳入后者以改进溶液的长期稳定性。它已从工作解决方案中被省略。然而，如果EDTA的浓度对分离很重要，则0.6 mM CaNa2EDTA或Na2EDTA可包含在溶液B或C中。
3. 作者报告了纯度约95%的单个核细胞(上带)和PMNs(下带)。
4. 最近的研究表明，使用碘克沙醇梯度纯化兔巨噬细胞时，这些细胞可被人重组GM-CSF和M-CSF诱导。Radovanovic等展示了摄入富含硅的水对慢性铝暴露的啮齿类动物腹腔巨噬细胞的系统性炎症和功能特征的影响。
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