【Serumwerk】巨噬细胞（Macrophages）和泡沫细胞（Foam cells）分离
巨噬细胞和泡沫细胞分离不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
巨噬细胞（Macrophages）分离
从腹膜液和肺泡灌洗液中分离
溶液制备
A. OptiPrep™（使用前轻轻摇动瓶子）
B. OptiPrep™稀释液：0.85%（w/v）氯化钠，6 mM氯化钾，0.6 mM EDTA，0.6 mM氯化钙，10 mM HEPES-NaOH，pH 7.0
C. 高渗混合器：1.245 M氯化钠，3 mM氯化钾，0.3 mM EDTA，0.3 mM氯化钙，5 mM HEPES NaOH，pH 7.0
试验方法
1. 将27.5体积的溶液A与32.5体积的溶液B混合，制备27.6% (w/v)的碘克沙醇原液。
2. 选择合适的密度阻挡层；对于1.091 g/ml/325 mOsm屏障，将0.6体积的27.5% (w/v)碘克沙醇原液与0.34体积的水和0.06体积的溶液C混合；1.106 g/ml和400 mOsm屏障，将0.7体积的27.5% (w/v)碘克沙醇原液与0.22体积的水和0.08体积的溶液C混合。如果可能，用渗透压计检查渗透压。
3.将7 ml细胞悬液置于3 ml所选密度屏障之上并于室温下700 g离心20 min。
4. 从界面收集巨噬细胞。
方法注释
将来自RPMI中腹腔灌洗的细胞在NycoPrep 1.068™(600 g处理10 min)上分层。这种商业培养基主要目的是从富含白细胞的血浆中分离人单核细胞。巨噬细胞被描述为在NycoPrep 1.068™内的中位带。像上面描述的密度屏障一样，它的渗透压升高。相同密度和渗透压摩尔浓度的介质可再次容易地从OptiPrep™制备。
方法补充
两层不连续梯度——浮选法
原液约为25% (w/v) NycodenzⓇ，10 mM EDTA用Hank’s平衡盐溶液(HBBS)(含10 mM EDTA)稀释以产生19%和14.5%的NycodenzⓇ两种溶液。将腹腔灌洗液中的细胞悬浮于19% NycodenzⓇ(12ml)中;将14.5% (16 ml) NycodenzⓇ和一层HBBS (12 ml)铺于其上。400 g作用30 min后，巨噬细胞在14.5%层上方显带，中性粒细胞在14.5%层下方显带。密度溶液可由OptiPrep™组成:用含有20 mM EDTA的等体积HBSS稀释，产生30% (w/v)碘克沙醇溶液;然后用HBSS-10 mM EDTA进一步稀释至14.5%和19% (w/v)碘克沙醇。
多步梯度
偶有四步不连续梯度分离肺泡和腹腔巨噬细胞与淋巴细胞和中性粒细胞，密度溶液是用含有4 mM EDTA的PBS稀释NycoPrep™ 1.15制备的。梯度约12%、14.5%、17.5%和20% (w/v) NycodenzⓇ 500 g离心45 min后，巨噬细胞在上层两层界面条带。为了从OptiPrep™生产这些密度溶液，并模拟NycodenzⓇ梯度的EDTA剖面，首先用等体积的PBS稀释OptiPrep™，以产生30% (w/v)碘克沙醇溶液，然后进一步用含有4 mM EDTA的PBS稀释，以制成12%，14.5%，17.5%和20% (w/v)碘克沙醇溶液。
巨噬细胞（Macrophages）分离
从脊髓组织和固有层分离
用0.15 M NaCl、10 mM MOPS、pH 7.4稀释OptiPrep™溶液，制备1.029、1.037、1.056和1.061 g/ml的四层不连续梯度，将每种溶液各1 ml覆盖于6 ml粗制脊髓细胞并在室温下以约700-800 g离心15 min。从小球中回收胶质细胞和炎性细胞。
固有层巨噬细胞悬浮在约5 ml 5.5% (w/v) NycodenzⓇ和分层超过3 ml 11% (w/v) NycodenzⓇ。在650 g离心20分钟后，巨噬细胞在界面条带。用PBS稀释NycoPrepⓇ1.15制备溶液;可通过用PBS简单稀释OptiPrep™来制备约相同密度的溶液(5.5%和11% w/v碘克沙醇)。
泡沫细胞（Foam cells）分离
对含有病变的材料进行胶原处理并筛分后，将洗涤的细胞在0.5、1.0、5.0、10和30% (w/v) NycodenzⓇ的5层不连续NycodenzⓇ梯度上分层，并在10℃下以1200 g离心15 min。泡沫细胞在5% ~ 10%界面呈带状分布。用缓冲盐水、平衡盐溶液或培养基稀释OptiPrep™，以得到相同的% (w/v)碘克沙醇溶液，可以产生完全相同的密度剖面梯度。
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