【Serumwerk】小鼠运动神经元富集部分（a mouse motoneuron enriched fraction from spinal cord）分离

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Serumwerk Bernburg AG

Serumwerk Bernburg AG 1893 OptiPrep™

溶液制备

A. OptiPrep™（使用前轻轻摇瓶）

B. Hank’s 平衡盐溶液（不含Ca²⁺和Mg²⁺）

C. B溶液中的3.5%（w/v）牛血清白蛋白。

D. 0.025% 胰蛋白酶

试验方法

总细胞部分分离

所有操作均在室温下进行。

1．解剖小鼠胚胎脊柱后，在溶液D中孵育20分钟。

2．通过注射器针头(21口径)重复通过分离组织。

3．将悬浮液覆盖于溶液C上并以120 g离心10 min以去除细胞碎片。

4．弃去上清液，将颗粒重新悬浮于溶液B中。

一个富含神经元的部分的分离

1．用溶液B稀释OptiPrep™，得到1.06 g/ml溶液，相当于10.4% (w/v)碘克沙醇。

2．将重悬浮小球层置于1.06 g/ml溶液之上。

3．以400 g离心25 min。

4．收集上层条带细胞，用B溶液稀释，700 g离心10 min，将运动神经元颗粒化。

根据需要洗涤细胞颗粒。

方法注释

1．对于其他物种的运动神经元，可能需要调节下层的密度。

2．调节屏障的密度将改变运动神经元的产量和纯度。

3．离心条件变化很大，800-900 g对于约15 min是相当常见的，但使用的速度低至100 g。

4．该方法可以从1 ~ 2个小鼠脊髓中纯化10 ~ 25,000个运动神经元。

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发布日期：2024-02-20 13:51:09
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