【Serumwerk】胃黏膜肠嗜铬细胞样细胞（ECL cells from gastric mucosa）分离
【Serumwerk】胃黏膜肠嗜铬细胞样细胞（ECL cells from gastric mucosa）分离
所需溶液制备
A. OptiPrep™（使用前轻轻摇瓶）
B. OptiPrep™稀释剂：60 mg/ml BSA，7.2 mM氯化镁，90 mM HEPES-NaOH pH 7.4。
C. OptiPrep™工作溶液（WS）为50%（w/v）碘二醇：将5体积OptiPrep™与1体积B溶液混合。
D. WS稀释剂：10 mg/ml BSA，140 mM氯化钠，1.2 mM硫酸镁，1 mM氯化钙，0.5 mM DTT，1 mM葡萄糖，15 mM HEPES-NaOH，pH 7.4
试验方案
1. 通过链霉蛋白酶消化分散胃黏膜细胞并通过离心洗脱部分纯化ECL细胞。
2. 用溶液D稀释溶液C，得到10.8% (w/v)碘克沙醇溶液(约ρ = 1.061 g/ml)为替代双层梯度，另外补充15%碘克沙醇溶液。
3. 将含有10 ml以上10.8%碘克沙醇溶液的悬浮液(2×106细胞)的1 ml ECL细胞置于15 ml离心管中，或使用10.8%和15%碘克沙醇各5 ml。
4. 离心机在1000g离心5分钟(高速)，使用缓慢加速(400转/分钟)，减速时无制动。ECL细胞条带略高于10.8%碘克沙醇层。
方法注释
由于这种方法从含有密度更大的细胞的混合群体中分离出密度最小的细胞，因此可能值得考虑另一种浮选策略。细胞应悬浮在15%（w/v）碘二醇溶液中，并在10.8%碘二醇溶液之下分层。这种浮选策略已非常成功地用于从组织消化液中分离其他低密度细胞。
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