【Serumwerk】肝枯否细胞(hepatic Kupffer cells）富集

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Serumwerk Bernburg AG 1893 OptiPrep™

所需溶液准备

用于悬浮粗制NPC悬浮液和稀释OptiPrep™的溶液可为常规缓冲盐水，如PBS，可添加1% BSA或平衡盐溶液，如Hank’s平衡盐溶液(HBSS)或NPC定制培养基，如Gey’s平衡盐溶液。在少数情况下，使用商业培养基，如F12或RPMI，可添加1% BSA或10% FCS。只有当溶液中含有10%血清时，培养基的密度才可能与PBS、HBSS或GBSS有显著差异(即约1.006 g/ml)。含有10%血清的培养基具有约1.009 g/ml的密度。

试验方法

从经密度调节的细胞悬液中提取的浮选

这是最简单的策略，即将粗制NPC悬浮液与OptiPrep™混合到一定浓度的碘克沙醇；少量的生理盐水或平衡盐溶液(2-3ml)分层在顶部并离心。NPC漂浮到与生理盐水和任何PC的界面，残余红细胞，不可活的细胞或细胞碎片或颗粒或悬浮在负载区。大多数离心是在4℃。

双密度层沉降

将HBSS中的粗制NPC制剂调整为11.7% (w/v)碘克沙醇(约ρ = 1.066 g/ml)；在17.6% (w/v)碘克沙醇(约ρ = 1.097 g/ml)溶液上分层，并覆盖HBSS。在4℃ 1400 g离心17分钟后，NPC在11.7%碘克沙醇层的顶部和底部条带；两层均进一步通过洗脱或粘附处理。

多层梯度-浮选

将粗制NPC悬浮于24%碘克沙醇中；它被低密度溶液覆盖最后是缓冲液。在4℃ 1400 g离心20 min后，星状细胞和枯否细胞分别主要在缓冲液/8.4%和8.4/11.5%界面条带。

清除碎片

有时使用24% (w/v)的相当致密的碘克沙醇溶液作为屏障，仅用于清除碎片和不能存活的细胞，这些细胞往往比枯否细胞密度大。也可以通过简单地将细胞悬液调整为约26% (w/v)碘克沙醇，在顶部放置少量HBSS, 400 g离心15分钟，并从界面收集细胞来实现清除。

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