【Serumwerk】肝非实质细胞（Hepatic non-parenchymal cells）纯化
所需溶液准备
OptiPrep™简单地用HBSS或GBSS稀释，以给出适当的密度，任何密度的所有溶液将是等渗的。
试验方法
从粗制NPC部分中去除红细胞和细胞碎片
方案一：
1．将NPC悬浮液置于ρ = 1.14-1.16 g/ml的屏障之上；
2．离心使NPC在界面处条带；
方案二：
1. 将NPC悬浮液与OptiPrep™混合(体积比分别为3.4:2.6)。
2. 在顶部加入0.5-1.0 ml GBSS；以400 g离心15 min并在界面处收集细胞。
胶原酶分散细胞
1．配制12.6%碘克沙醇溶液：将OptiPrep™与任何平衡盐溶液或培养基(分别为12.6体积 + 47.4体积)混合。
2．将胶原酶分散细胞的悬浮液以50 g离心3 min。
3．回收上清液并以50 g再次离心。
4．回收上清液并以850 g离心10 min。
5．取出并丢弃所有上清液，将颗粒重悬于12.6%碘克沙醇中。
6．将1-2 ml平衡盐溶液或培养基置于顶部并以3300 g离心30 min，使残余PC细胞和红细胞成球。
7．允许转子在没有刹车的情况下减速。从屏障顶部收集NPC细胞。
胶原酶/酶分散细胞
1．配制40%碘克沙醇溶液：混合4体积的OptiPrep™和2体积的GBSS。
2．将粗制的非实质细胞悬浮于GBSS中。
3．将40%碘克沙醇与细胞悬液充分(但要轻柔)混合，使碘克沙醇终浓度为17% (w/v)碘克沙醇溶液(ρ = 1.096 g/ml)。
4．将1-2 ml GBSS置于顶部并以400 g在20℃下离心15 min。
5．允许转子在没有刹车的情况下减速。
收集NPC细胞，在GBSS和17%碘克沙醇层的界面条带。
方法注释
在某些情况下，细胞悬液只是与OptiPrep™混合，而不是与40%碘克沙醇工作液混合。碘克沙醇的最终浓度是可变的，如11.5%，13.2%，和16.8%。
OptiPrep™用HEPES缓冲盐水稀释，pH值7.4，含0.2%牛血清白蛋白，产生11%，13%，16%和18% (w/v)碘克沙醇溶液。将NPC颗粒悬浮于11%碘克沙醇中，每10 ml悬浮液下层分别加入13%和16%碘克沙醇溶液各10 ml以及18%碘克沙醇溶液5 ml。将梯度在6,500 g下离心30 min并且使其在不制动的情况下减速。NPC被划分在11-13%和13%-16%的界面上。低密度界面特别富集于星状和卵圆形细胞。
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