【Genovis】GingisREX (RgpB）精氨酸特异性蛋白酶

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B1-BD1-008 B1-BD1-096 FabDELLO GENOVIS

FabDELLO是一种蛋白酶，它在铰链区上方特异性单一位点酶切人IgG1，在两小时内生成完整的Fab和Fc片段，无需降解条件。该酶对具有突变铰链区域的抗体具有活性，例如LALA突变，并可实现中级（MiddleLevel）LC-MS分析，以表征具有突变铰链的抗体的关键质量属性。

◆◆人IgG1

◆◆KSCDK / THTCPPCP

◆◆2小时反应时间

◆◆需要钙离子参与，如200 mM CaCl₂

抗体亚基工作流程

FabDELLO在铰链上方的单一位点消化人IgG1（...KSCDK /THTCPPCP…），生成完整的Fab和Fc 片段。如果 N-聚糖被去除，那么第二个消化位点可能出现在 Fc 上。

FabDELLO需要存在钙离子的条件下发挥酶活性。最佳条件是37°C，pH 7-8.5。

冻干酶，

特异性酶切人IgG1

突变抗体的中级（Middle-Level）LC-MS分析

突变的铰链区是治疗性候选抗体的常见修饰。铰链突变可能影响具有高底物特异性的酶的抗体消化效率。FabDELLO对铰链上方暴露的赖氨酸残留物起作用，然后具有突变铰链区域的抗体进行中级（Middle-Level）LC-MS分析。在这里，市售的IgG1利桑基珠单抗（risankizumab）的铰链区有LALA突变。用FabDELLO消化和降解，再用中级（Middle-Level）LC-MS分析。特定峰表示：用FabDELLO消化生成均质片段，酶性能稳定。

用FabDELLO消化后利桑珠单抗的中级（Middel-Level）LC-MS分析。消化的样品经20 mMDTT 1小时37°C以降解半胱氨酸桥键，通过反相LC-MS（沃特世™BioAccord™系统），沃特世™BioReolve™ RP mAb柱（2.1×50mm）。右图为UV 280 色谱图（ Fc/2、LC 和 Fd），和 Fc/2、LC和 Fd的质谱图。

完全消化突变抗体和Fc融合蛋白

FabDELLO在铰链区上方特异性单一位点酶切人IgG1，生成完整的Fab 和 Fc 片段。为了验证FabDELLO的特异性活性，选择IgG1和Fc融合蛋白通过非还原法进行消化和SDS-PAGE分析。完全消化所有底物，包括IgG1，难以消化的LALA和低密度脂蛋白酶（LFLE）突变。FabDELLO酶在如此广泛的底物上的精确性和有效性得到验证，可用于生物制药的研发。