【Genovis】GlycOCATCH,O-糖蛋白的富集

【Genovis】GlycOCATCH,O-糖蛋白的富集

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GlycOCATCH是一种纯化粘蛋白型O糖基化蛋白和多肽的亲和树脂。该亲和树脂包含非活性的OpeRATOR酶,该酶被设计用于高亲和力结合O-糖基化蛋白和肽。GlycOCATCH的应用包括O-糖蛋白和多肽的特异性富集或去除、糖组学、复杂样品的研究和生物制药的表征。

◆◆粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽

◆◆与携带粘蛋白型O-聚糖的糖蛋白和肽结合

◆◆2小时工作流程

◆◆使用SialEXO(试剂盒中包含的)去硫酰化,增加了结合

亲和纯化工作流程


GlycOCATCH是以小柱形式提供的,可以方便地富集粘蛋白O型糖蛋白。GlycOCATCH蛋白与O-糖蛋白具有高亲和力结合,由于相互作用强,使用8 M尿素进行洗脱。

另外,洗脱可以用所含的OpeRATOR酶进行,该酶消化O-聚糖位点N端结合的O-糖蛋白。在这个实验中,肽在自然条件下回收。由于非唾液酸化的O-聚糖更有效地结合到树脂上,试剂盒包含唾液酸酶混合物SialEXO。

产品形式


用于粘蛋白型O-糖蛋白

亲和纯化和富集的树脂


利用GlycOCATCH®选择性纯化O-糖基化多肽


在这里,我们从肽水平研究了GlycOCATCH的O-聚糖特异性。O-糖基化肽被添加到非糖基化肽的混合物中,并上样到GlycOCATCH上,树脂被洗涤,结合的肽被8 M尿素洗脱。样品纯化后,用RP-LC-MS进行分离和分析。数据显示,选择性纯化的糖酵母蛋白肽(glycodrosocin peptide),携带一个核心1 O聚糖。


使用GlycOCATCH进行亲和纯化 携带核心1 O-聚糖的O-糖基化肽(糖酵母蛋白肽glycodrosoin)的选择性纯化。


使用GlycOCATCH®亲和纯化O-糖基化蛋白


在质谱分析之前,GlycOCATCH可用于O-糖基化多肽和蛋白质的特异性富集。

GlycOCATCH的强结合能力被有效地用于从复杂的基质(如人血清)中富集O糖基化蛋白。


从人血清中富集O-糖蛋白。用SialEXO处理人血清,并在GlycOCATCH树脂上孵育。洗脱后的蛋白质经变性、还原、烷基化和胰酶消化。采用RP-LC-MS/MS对多肽进行分析,并在瑞士Prot数据库中检索。上图列出了识别出的O-糖基化蛋白和其他具有大于12匹配肽段的蛋白,以及MASCOT得分大于200的。

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