【Genovis】IgMBRAZOR™，特异性单一位点酶切IgM
IgMBRAZOR是一种独特的IgM特异性蛋白酶，它在重链中CH2结构域以下的一个特定位点消化人IgM，产生均匀的F(ab’)2和Fc片段。该酶能够对复杂和高分子量的人IgM进行亚基水平的分析，从而有助于在诸如疫苗、治疗药物和诊断的开发过程中对IgM进行表征。
◆◆人IgM
◆◆VPDQDT / AIRVFA（在重链区）
◆◆30分钟酶切时间
◆◆无需还原剂和辅助因子
酶切流程
IgMBRAZOR是一种独特的IgM特异性酶，可以在一个特定的位点上消化/酶切人IgM。消化在30分钟内完成，由于酶的特异性，即使孵育时间延长，也没有过度消化的风险。
该酶在pH为5.5至9.0时具有活性，不需要还原条件或辅助因子即可发挥活性。最佳的酶活是在37°C，消化也可以在室温下进行，但是需要增加孵育时间。
产品形式
冻干粉用于酶切IgM
位点特异性酶切IgM
为了证明IgMBRAZOR的位点特异性，用IgMBRAZOR冻干粉酶在37°C下30分钟消化人骨髓瘤IgM，并与未消化的IgM进行比较。为了便于数据解释，在变性和还原条件下使用PNGase F去除N-聚糖。IgMBRAZOR酶切后质谱分析显示：酶切后的片段质量均一，且与单位点(…VPDQDT/ AIRVFA…)的酶切一致。IgMBRAZOR消化快速、简便，且在生理条件下进行。IgM的中级/亚基分析是以最少的样品制备和数据分析产生高分辨率的大量数据，可以有效地用于表征，质量控制，稳定性测试和治疗性抗体的生产监测。
位点特异性酶切IgM. IgM首先用IgMBRAZOR冻干粉酶在37℃消化30分钟，然后使用PNGase F冻干酶在还原和变性条件下去除Fc N-聚糖，以便于数据解释。经过 IgMBRAZOR和PNGase F酶切后完整的去糖基化重链和VH-CH1-CH2和CH3-CH4片段的反卷积质谱如图右图所示。 插入图（顶部和底部光谱图）显示了C端酪氨酸丢失和不丢失的两个峰。 采用Waters™ BioAccord™ LC-MS系统进行反相LC-MS分析。
利用IgMBRAZOR™进行同型特异性消化
IgMBRAZOR对人IgM抗体具有同型特异性。在这里，所有四种人IgG亚类以及IgA和IgM与IgMBRAZOR冻干粉酶一起孵育。
未观察到任何IgG亚类或IgA被消化，而IgM在30分钟内被成功消化为F(ab’)2和Fc片段。
这显示了IgMBRAZOR的高特异性，并证明了在复杂样品（如血清、血浆和血液样品）中使用该酶没有脱靶消化风险的可能性。
IgMBRAZOR的同型特异性。人IgG1（曲妥珠单抗）、IgG2（帕尼单抗）、IgG3（来自人血清; 多克隆）、IgG4（纳武利尤单抗）和IgA（来自人血清；多克隆）与IgMBRAZOR冻干粉酶在37℃下孵育2小时。IgM（来自人血清；多克隆）与IgMBRAZOR冻干粉酶在37℃下孵育30分钟或2小时。所有样品还原后用SDS-PAGE分析。
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