【Genovis】OmniGLYZOR™，N-和粘蛋白型O -聚糖水解酶

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Genovis

G3-OM6-005 G3-OM6-010 G1-OM6-001 genovis OmniGLYZOR™

OmniGLYZOR™包含用于去除抗体、融合蛋白和其他糖基化蛋白上的N-和简单粘蛋白型O-聚糖的固定化酶的混合物。

去除聚糖被广泛用于减少异质性，以促进蛋白质分析，例如质谱分析。去糖基化也可以用来研究糖链的功能作用。

◆◆糖蛋白上的N-和简单粘蛋白型O聚糖

◆◆从糖蛋白中水解N-和O-聚糖

◆◆1-4小时的消化时间

◆◆RapiGest™ 和PNGase F 包含在试剂盒内

去糖基化工作流程

OmniGLYZOR含有去除N-聚糖和最常见的粘蛋白型O-聚糖所需的酶，即单、二烯基核心1和Tn抗原(α-GalNAc)。OmniGLYZOR中含有PNGase F、O-糖苷酶、唾液酸酶和α-GalNAcase活性。天然糖蛋白样品与OmniGLYZOR树脂在小柱中孵育1-4小时；然后通过离心步骤轻松地收集去糖基化的糖蛋白。除非底物蛋白变性，否则PNGaseF很难或无法接近某些N-糖基化位点。因此，在变性条件下使用冻干PNGase F，通过额外的去糖基化步骤可以除去剩余的N-聚糖。OmniGLYZOR试剂盒包含冻干PNGase F和RapiGest SF。

产品形式

一种用于携带N-和简单O-聚糖的糖

蛋白去糖基化的混合固定酶的小柱

N型和粘蛋白型O-聚糖的有效去除

我们使用两种治疗蛋白作为底物，即高度糖基化的Fc融合蛋白依那西普和促红细胞生成素(EPO)，展示了OmniGLYZOR的性能。由于糖链的异质性，完整的分析导致复杂的质谱。用OmniGLYZOR在37°C下孵育1小时, N-和O-聚糖被有效去除，可以看到未修饰蛋白对应的单峰。对于EPO，由于OmniGLYZOR不能全部有效水解，因此在蛋白质上留下了少量经乙酰化唾液酸修饰的O-聚糖。也用另一种市售去糖基化产品处理两种底物蛋白，根据制造商的建议(37℃，O/N孵育)，数据和比较如下图所示。

用OmniGLYZOR完全水解N-和O-聚糖去糖基化 a)依那西普和 b) EPO。底物蛋白在OmniGLYZOR小柱上37°C消化，或与另一种市售的去糖基化产品在37℃下1小时和20小时消化。为了简化依那西普的分析，用FabRICATOR消化去糖基化的蛋白，从Fc片段中分离出O-糖基化的TNFR结构域。使用Waters™ BioAccord™反相 LC-MS系统对得到的亚基进行分析。对促红细胞生成素进行了相同的分析。完整状态（Control）与完全去糖基化的底物蛋白质相对应的峰用橙色阴影表示。

变性反应条件下的去糖基化反应

C1抑制剂是一种人血浆来源的生物治疗药物，由6个N-聚糖和多达28个O-聚糖修饰，主要由唾液酰核心1结构组成。如果没有对这种高度不均一的蛋白质进行预处理，反相LC-MS分析产生了一个复杂的质谱，无法详细解释。在天然条件下使用OmniGLYZOR小柱，所有O-聚糖在3小时内被有效去除。然而，蛋白质上仍有1- 3个N-聚糖。在变性条件下，使用OmniGLYZOR试剂盒中包括的冻干PNGaseF和MS兼容的RapiGest™ SF表面活性剂，通过额外的去糖基化步骤除去这些难以接近的N-聚糖。观察到除分子上少量的核心2 O-聚糖外，所有的聚糖都被完全去除。