【Genovis】GlySERIAS，水解柔性连接子

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Genovis

genovis A0-GS1-020 A0-GS6-010 A0-GS6-020 GlySERIAS™ Immobilized GlySERIAS™ Lyophilized

GlySERIAS是一种独特的酶，可消化灵活的富含甘氨酸的融合蛋白连接子，如Gly4Ser和GlyxSery (GS)，以及聚甘氨酸(G)连接子。该酶能够分离多功能融合蛋白的各个结构域，以促进表征。

融合蛋白的中级分析既可以降低总体样本的复杂性，也可以进行域特异性鉴定和翻译后修饰的监测。

◆◆带有GS或G柔性连接子的融合蛋白

◆◆由Gly或Gly和Ser残基的重复序列组成的柔性连接子

◆◆1小时反应 (可能需要对个别蛋白质进行优化)

◆◆无需还原剂或其他辅酶因子

消化工作流程

GlySERIAS是一种独特的酶，用于消化带有由重复序列的甘氨酸或甘氨酸和丝氨酸残基组成的柔性连子的融合蛋白。该酶在天然反应条件下是活跃的，并使复杂融合蛋白的中级表征成为可能。连接子区域同时在几个位点被消化，导致先前连接的组分分离。最佳活性发生在pH值7.6时。消化产物的长度可以根据所需的最终产物而变化。

对于更强的连接子去除，我们推荐固定化的GlySERIAS；对于连接子表征，我们推荐冻干的GlySERIAS。

产品形式

GlySERIAS™ Lyophilized

GlySERIAS™ Immobilized

使用GlySERIAS™分析融合蛋白的柔性连接子

融合蛋白dulaglutide由两个胰高血糖素样肽-1 (GLP-1)分子组成，通过柔性GS连接子连接到人类IgG4的Fc区域。为了分别研究多肽和Fc区，从而能够识别特定的PTMs，使用GlySERIAS消化dulaglutide。用冻干的GlySERIAS消化得到几种含有不同数量丝氨酸和甘氨酸残基的Fc产品。用固定化GlySERIAS消化得到的同质Fc/2能够详细研究Fc区域的质量属性。

使用GlySERIAS消化Dulaglutide。用GlySERIAS冻干粉1小时或过夜消化dulaglutide的柔性GS连接子；或用固定化GlySERIAS在37°C，非变性条件下消化dulaglutide的柔性GS连接子；然后用GlycINATOR冻干粉消化Fc聚糖，以降低样品的复杂性；然后，在37℃下与4 M盐酸胍和100 mM DTT孵育1小时以变性和还原链间二硫键。a) 样品制备流程说明。采用反相LC-MS对样品进行分析。b) Fc/2片段的反卷积质谱。c) GLP-1肽的反卷积质谱。酶切产物用反相色谱分离 (ACQUITY PremierProtein BEH C4, 300Å, 1.7 µm 2.1 x 100 mm, Waters™)，并用ESI-QTOF MS (Bruker Impact II)分析。d) 连接GLP-1肽和Fc/2亚基的柔性连接子的示意图。

BiTE分子的中级分析

在这里，一种研究级生物仿制药blinatumomab（一种对CD19和T细胞标记CD3具有特异性的BiTE分子）在室温下用固定化GlySERIAS消化。LC-MS结果表明，所有三个连接子区域都被酶切（数据见网页），α-CD3 VL和VH链被洗脱为一个色谱峰，CD19 VH和VL链被洗脱为单独的峰。四个结构域的分离（数据所示）表明了在完整蛋白水平上识别的蛋白质修饰的位置，证明了使用固定化GlySERIAS的中级工作流程对包含几个柔性连接子的融合蛋白进行质量控制的能力。