【Cellntec】人乳腺上皮细胞的分离（Human Mammary Epithelium Isolation）

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人乳腺上皮细胞 Human Mammary Epithelium Isolation 女性生殖细胞系统 Female Reproductive Cell System 人原代细胞分离 Human Primary cells Isolation Cellntec CnT-Prime Epithelial Proliferation Medium CnT-PR

小白求助前辈指路

人乳腺上皮细胞分离不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人乳腺上皮细胞的分离

（Human Mammary Epithelium Isolation）

本文档描述了使用CnT-Prime（CnT-PR）培养基分离原代人乳腺上皮细胞的推荐方案。建议在dispase/胶原酶分离后直接接种小的细胞团块/器官样结构。

操作步骤

1.将培养基、PBS、Accutase以及所用到的酶等提前置于室温平衡。

2.将乳腺组织样本切成小块，去除多余的脂肪。在CnT-PR培养基中加入1倍dispase+500 μg/mL胶原酶Ⅱ+2倍G/A，37°C孵育过夜。

3.用巴氏管或涡旋器剧烈振荡以打散细胞团块。1000 rpm的速度离心5 min，培养基洗涤直到去除所有脂肪。

4.通过40 µm的滤网（细胞过滤器）过滤，用10 mL培养基洗涤滤网。将器官样结构从滤网上反向洗涤到新的管中。用培养基洗涤上皮器官样结构一次或两次。

5.将器官样结构直接接种到培养皿中（推荐），或者如果需要单个细胞，则在接种细胞之前用Accutase消化器官样结构，然后以2×10⁴ cells/cm²的密度接种细胞。

6.接种后，用添加IsoBoost的CnT-PR培养基培养细胞至少3天，随后切换到标准的CnT-PR培养基。细胞附着后每2-3天更换培养基。在细胞达到充分生长之前，使用Accutase在37°C下进行10-15分钟的细胞传代。传代后的推荐接种密度为4,000 cells/cm²。

表 1 Human Mammary Epithelium分离材料

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发布日期：2024-01-19 14:58:50
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