【Cellntec】原代人间充质干细胞（MSCs）的分化及染色

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原代人间充质干细胞 MSCs CnT-Prime MSC Proliferation Medium Xeno-Free Cellntec

小白求助前辈指路

原代人间充质干细胞分化不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

MSC的分化及染色

1.在扩增培养基中，以5,000 cells/cm²密度接种要分化的细胞（若细胞来自正在培养的细胞，使用Accutase对细胞进行解离）。

2.第二天，将培养基更换为所需的扩增培养基，并添加脂肪分化补充剂（#CnT-MSCDIFF-AD.S；每50 mL培养基添加1 mL）。

3.在分化培养基中继续培养细胞10-21天，每周更换培养基3次。

4.分化期结束后，去除培养基，用PBS洗涤细胞，然后用10%甲醛溶液在室温下固定45分钟。

5.准备好油红O染液：3份浓缩液与2份去离子水混合，室温静置10分钟。在使用前用0.2微米滤器过滤（2 h内使用）。

6.从细胞中去除甲醛溶液，并用去离子水冲洗细胞。向细胞中加入60%异丙醇（250 µm/cm²），室温静置5 min。

7.去除异丙醇，向细胞中加入油红O染液（250 µm/cm²），确保染料均匀分布在培养容器中。室温避光孵育细胞15 min。

8.去除油红O溶液，用去离子水洗涤细胞两次。加入血红素（100 µm/cm²），并对细胞进行3分钟的对比染色。去除染料，并用流动水仔细冲洗，确保水流不直接落在细胞层上。

9.加入dd H₂O（250 µm/cm²），细胞准备好进行成像（脂滴将呈现红色，细胞核呈现蓝色）。

表 1 MSCs脂肪分化培养材料

表 2 MSCs脂肪分化培养材料

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原代人间充质干细胞 MSCs CnT-Prime MSC Proliferation Medium Xeno-Free Cellntec
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发布日期：2024-02-02 15:04:41
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