【Cellntec】原代人间充质干细胞(MSCs)的分化及染色
【Cellntec】原代人间充质干细胞(MSCs)的分化及染色
原代人间充质干细胞分化不成功、实验做不出来怎么办?新手小白迫切求助,希望各位前辈在文章下方留言,分享自己的经验,为小白们答疑解惑!
MSC的分化及染色
1.在扩增培养基中,以5,000 cells/cm2密度接种要分化的细胞(若细胞来自正在培养的细胞,使用Accutase对细胞进行解离)。
2.第二天,将培养基更换为所需的扩增培养基,并添加脂肪分化补充剂(#CnT-MSCDIFF-AD.S;每50 mL培养基添加1 mL)。
3.在分化培养基中继续培养细胞10-21天,每周更换培养基3次。
4.分化期结束后,去除培养基,用PBS洗涤细胞,然后用10%甲醛溶液在室温下固定45分钟。
5.准备好油红O染液:3份浓缩液与2份去离子水混合,室温静置10分钟。在使用前用0.2微米滤器过滤(2 h内使用)。
6.从细胞中去除甲醛溶液,并用去离子水冲洗细胞。向细胞中加入60%异丙醇(250 µm/cm2),室温静置5 min。
7.去除异丙醇,向细胞中加入油红O染液(250 µm/cm2),确保染料均匀分布在培养容器中。室温避光孵育细胞15 min。
8.去除油红O溶液,用去离子水洗涤细胞两次。加入血红素(100 µm/cm2),并对细胞进行3分钟的对比染色。去除染料,并用流动水仔细冲洗,确保水流不直接落在细胞层上。
9.加入dd H2O(250 µm/cm2),细胞准备好进行成像(脂滴将呈现红色,细胞核呈现蓝色)。
表 1 MSCs脂肪分化培养材料
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表 2 MSCs脂肪分化培养材料
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