【Cellntec】人口腔上皮细胞的分离（Human Oral Epithelium Isolation）
人口腔上皮细胞分离不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人口腔上皮细胞的分离
（Human Oral Epithelium Isolation）
本操作描述了使用CnT-Prime（CnT-PR）培养基分离原代人口腔上皮细胞的方法。
操作步骤
1.将培养基、PBS、Accutase以及所用到的酶等提前置于室温平衡。
2.将收集的口腔组织样本放入培养基中，4°C存储，直到开始分离前一天的傍晚。
3.将口腔组织样本放入15 mL的离心管中，加入10 mL的1倍dispase溶液（用CnT-PR稀释），以及2倍G/A。在4°C下孵育组织样本过夜（约15 h）。
4.第二天将组织样本连同dispase溶液转移到培养皿中。将每个组织样本转移到含有CnT-PR培养基的新培养皿中，以洗去多余的dispase。
5.组织样本浸入CnT-PR培养基的同时，用两对弯镊轻轻分离基质（粉红色、不透明、黏稠）和上皮（白色、半透明）。如果不易分离，将组织样本放回含有dispase溶液的培养皿中，在室温下再处理60 min。
6.将上皮组织片转移到2 mL的Accutase中，以分离上皮细胞。37°C下孵育10-15 min（用盖子盖住培养皿以防止蒸发）。
7.移液管轻轻上下移液以打散上皮层。如果消化不完全，再进行5 min的Accutase处理。将单细胞溶液转移到15 mL的离心管中，并加入5 mL的CnT-PR培养基稀释Accutase。室温180 g 离心5分钟。
8.吸去上清液，用2 mL CnT-PR重悬细胞沉淀。计数细胞，并以2×104 cells/cm2的密度接种到培养容器中，置于细胞培养箱中培养。
9.接种后，用添加IsoBoost的CnT-PR培养基培养细胞至少3天，随后切换到标准的CnT-PR培养基。
表 1 Human Oral Epithelium 分离材料
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