【Cellntec】人气道上皮细胞的分离（Human Airway Epithelium Isolation）
人气道上皮细胞分离不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人气道上皮细胞的分离
（Human Airway Epithelium Isolation）
本操作步骤描述了使用CnT-Prime Airway（CnT-PR-A）培养基从气道的一段气管中分离原代人气道上皮细胞的过程。
该方案建议在dispase分离后直接接种小的细胞团块/器官样结构。
操作步骤
1. 将培养基、PBS、Accutase以及所用到的酶等提前置于室温平衡。
2. 用PBS洗涤气管，并将其切成大小约为1.0 ×1.0 cm的小块，并放入用CnT-PR-A稀释的1 × dispase溶液中，4°C下孵育15-18 h。
3. 将组织块转移到单独的培养皿中，加入少量CnT-PR-A（约3 mL）。使用弯镊轻轻摩擦组织块，将上皮组织与基质分离，脱落的上皮组织会漂浮起来，将其转移到离心管中。
4. 用移液枪在离心管中上下移液，将上皮组织碎片分解成小的细胞团块。将细胞团块接种到表面积大约是起始气管块表面积的10倍的培养容器中。
5. 在初始的3天内，使用添加了IsoBoost（CnT-ISO-50）的CnT-PR-A培养基培养细胞，随后切换到标准的CnT-PR-A培养基。每2-3天更换培养基。
6. 在细胞达到充分生长之前，或者当细胞群中心的细胞开始改变形态时（大约每个细胞群有约2,000个细胞），进行细胞传代。推荐使用Accutase进行细胞传代。传代后，以4 × 103个细胞/cm2的密度在培养容器中接种活细胞。置于培养箱中培养。
表 1 Human Airway Epithelium分离材料
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