【ScienCell】人乳腺血管内皮细胞（HMVEC）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 女性生殖细胞系统 Female Reproductive Cell System Sciencell 人乳腺血管内皮细胞 Mammary Vascular Endothelial Cells Endothelial cell medium 1001

小白求助前辈指路

人乳腺血管内皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人乳腺血管内皮细胞

（HMVEC）

乳腺血管内皮细胞（MVEC）分泌乳腺衍生生长抑制因子，调节乳腺内皮细胞增殖和分化，并能调节淋巴细胞的运输和炎症反应，因此与乳腺炎相关。研究表明，MVEC在乳腺癌的发展中通过血管生成发挥关键作用。HMVEC培养是鉴定乳腺癌治疗开发靶点的重要模型。

HMVEC分离自人乳房组织，可通过vWF/Factor VIII和CD31 (PECAM1)的特异性抗体免疫荧光染色进行鉴定。

培养方式

培养瓶：纤连蛋白（Bovine Plasma Fibronectin, 2 µg/cm²）包被培养瓶。

培养基：HMVEC用提供的ECM完全培养基（包含基础培养基、1% ECGS、1% P/S）培养。

操作步骤

1) 包被纤连蛋白（2 µg/cm²）培养瓶的准备（T-75培养瓶）：将10 mL无菌的Dulbecco's磷酸盐缓冲盐（DPBS）与150 µL纤连蛋白原液混匀后加入到T-75培养瓶中，将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少2小时）。在铺细胞前将未凝固纤连蛋白溶液吸出（可重复使用2次），加入20 mL ECM完全培养基（基础培养基、ECGS和P/S按比例混合配制）。

2) 吸出未凝固的纤连蛋白溶液，T-75中加入20 mL的完全培养基，将解冻后的细胞小心加入到培养基中，十字交叉法轻柔平晃培养瓶。（注：不建议在解冻后对细胞进行稀释和离心，因为这些与培养物中残留DMSO的作用相比，这些作用对细胞的损伤更大；将HMVEC置于纤连蛋白包被的培养瓶中，促进生长同样重要。）

换液：培养开始后16小时内不要干扰培养。次日更换培养液，去除残留的DMSO和未贴壁细胞。之后每三天更换一次培养基，直到培养达到大约70%的密度。一旦培养达到大约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到大约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90%时进行传代。

1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入8 mL DPBS和2 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据6000-8000 cells/cm²的密度传代至预先用纤连蛋白包被的培养瓶中。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HMVEC培养材料

参考文献

[1] Breter H, Erdmann B. (1994) “Localization of mammary-derived growth inhibitor in capillary endothelial cells of the bovine mammary gland.” Cell Tissue Res. 277: 457-64.

[2] Sordillo LM, Streicher KL. (2002) “Mammary gland immunity and mastitis susceptibility.” J Mammary Gland Biol Neoplasia. 7: 135-46.

[3] Vermeulen PB, van Golen KL, Dirix LY. (2010) “Angiogenesis, lymphangiogenesis, growth pattern, and tumor emboli in inflammatory breast cancer: a review of the current knowledge.” Cancer. 116: 2748-54.

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[5] Korkaya H, Liu S, Wicha MS. (2011) “Breast cancer stem cells, cytokine networks, and the tumor microenvironment.” J Clin Invest. 121: 3804-9.

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