【ScienCell】人子宫颈微血管内膜细胞（HCerMEC）产品使用攻略
人子宫颈微血管内膜细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人子宫颈微血管内膜细胞
（HCerMEC）
宫颈位于子宫下部，其功能是促进生育并保护女性生殖道和胎儿免受潜在病原体的侵害。此外，宫颈在分娩过程中起到关键作用，通过变薄和扩张，使婴儿能够从子宫中通过。血管内皮细胞作为血管内壁的一部分，积极参与许多重要的生物过程。宫颈微血管内皮细胞（CerMEC）限制细胞和可溶性物质在血管和周围组织之间的通透性。CerMEC还在血管生成、血管形成和炎症反应中发挥关键作用。研究表明，CerMEC的血管生成促进宫颈癌的发展，甚至可能启动直接促进肿瘤生长的信号事件。HCerMEC的培养可应用于研究正常和病理性血管生成机制，并开发治疗宫颈癌的方法。
HCerMEC分离自人子宫颈，其vWF/Factor VIII和CD31 (PECAM)特异性免疫荧光染色成阳性。
培养方式
培养瓶：纤连蛋白（Bovine Plasma Fibronectin, 2 µg/cm2）包被培养瓶。
培养基：HCerMEC用提供的ECM完全培养基（包含基础培养基、1% ECGS、1% P/S）培养。
操作步骤
1) 包被纤连蛋白（2 µg/cm2）培养瓶的准备（T-75培养瓶）：将10 mL无菌的Dulbecco's磷酸盐缓冲盐（DPBS）与150 µL纤连蛋白原液混匀后加入到T-75培养瓶中，将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少2小时）。在铺细胞前将未凝固纤连蛋白溶液吸出（可重复使用2次），加入20 mL ECM完全培养基（基础培养基、ECGS和P/S按比例混合配制）。
2) 吸出未凝固的纤连蛋白溶液，T-75中加入20 mL的完全培养基，将解冻后的细胞小心加入到培养基中，十字交叉法轻柔平晃培养瓶。（注：不建议在解冻后对细胞进行稀释和离心，因为这些与培养物中残留DMSO的作用相比，这些作用对细胞的损伤更大；将HCerMEC置于纤连蛋白包被的培养瓶中，促进生长同样重要。）
换液：培养开始后16小时内不要干扰培养。次日更换培养液，去除残留的DMSO和未贴壁细胞。之后每三天更换一次培养基，直到培养达到大约70%的密度。一旦培养达到大约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到大约90%的密度。
传代：当细胞密度达到90%时进行传代。
1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入8 mL DPBS和2 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000-7000 cells/cm2的密度传代至预先用纤连蛋白包被的培养瓶中。
生长条件
在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 HCerMEC培养材料
参考文献
[1] Danforth D. (1983) “The morphology of the human cervix.” Clin Obstet Gynecol. 26(1):7-13.
[2]Sumpio B, Riley J, Dardik A. (2002) “Cells in focus: endothelial cell.” Int J Biochem Cell Biol. 34(12): 1508-1512.
[3] Neiva K, Warner K, Campos M, Zhang Z, Moren J, Danciu T, Nör J. (2014) “Endothelial cell-derived interleukin-6 regulates tumor growth. BMC Cancer. 14: 1-11.
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