【ScienCell】人子宫颈微血管内膜细胞(HCerMEC)产品使用攻略

【ScienCell】人子宫颈微血管内膜细胞(HCerMEC)产品使用攻略

小白求助 前辈指路


人子宫颈微血管内膜细胞培养不成功、实验做不出来怎么办?新手小白迫切求助,希望各位前辈在文章下方留言,分享自己的经验,为小白们答疑解惑!


人子宫颈微血管内膜细胞

(HCerMEC)

宫颈位于子宫下部,其功能是促进生育并保护女性生殖道和胎儿免受潜在病原体的侵害。此外,宫颈在分娩过程中起到关键作用,通过变薄和扩张,使婴儿能够从子宫中通过。血管内皮细胞作为血管内壁的一部分,积极参与许多重要的生物过程。宫颈微血管内皮细胞(CerMEC)限制细胞和可溶性物质在血管和周围组织之间的通透性。CerMEC还在血管生成、血管形成和炎症反应中发挥关键作用。研究表明,CerMEC的血管生成促进宫颈癌的发展,甚至可能启动直接促进肿瘤生长的信号事件。HCerMEC的培养可应用于研究正常和病理性血管生成机制,并开发治疗宫颈癌的方法。

HCerMEC分离自人子宫颈,其vWF/Factor VIII和CD31 (PECAM)特异性免疫荧光染色成阳性。


培养方式


培养瓶:纤连蛋白(Bovine Plasma Fibronectin, 2 µg/cm2)包被培养瓶。

培养基:HCerMEC用提供的ECM完全培养基(包含基础培养基、1% ECGS、1% P/S)培养。

操作步骤

1) 包被纤连蛋白(2 µg/cm2)培养瓶的准备(T-75培养瓶):将10 mL无菌的Dulbecco's磷酸盐缓冲盐(DPBS)与150 µL纤连蛋白原液混匀后加入到T-75培养瓶中,将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜(或至少2小时)。在铺细胞前将未凝固纤连蛋白溶液吸出(可重复使用2次),加入20 mL ECM完全培养基(基础培养基、ECGS和P/S按比例混合配制)。

2) 吸出未凝固的纤连蛋白溶液,T-75中加入20 mL的完全培养基,将解冻后的细胞小心加入到培养基中,十字交叉法轻柔平晃培养瓶。(注:不建议在解冻后对细胞进行稀释和离心,因为这些与培养物中残留DMSO的作用相比,这些作用对细胞的损伤更大;将HCerMEC置于纤连蛋白包被的培养瓶中,促进生长同样重要。)

换液:培养开始后16小时内不要干扰培养。次日更换培养液,去除残留的DMSO和未贴壁细胞。之后每三天更换一次培养基,直到培养达到大约70%的密度。一旦培养达到大约70%的密度,每隔一天更换一次培养基,直到培养达到大约90%的密度。

传代:当细胞密度达到90%时进行传代。

1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡(不建议37℃加热)。

2) 弃除旧培养基,并用DPBS清洗细胞后吸除加入8 mL DPBS和2 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱(注:原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶),一段时间后镜下观察,待细胞完全变圆、脱落,轻轻拍打底部和侧面,加入2 mL FBS,将细胞悬液转移至15 mL离心管中,1000 rpm离心5 min,用新培养基重悬细胞沉淀后计数,根据5000-7000 cells/cm2的密度传代至预先用纤连蛋白包被的培养瓶中。

生长条件

在CO2浓度为5%,温度为37℃,相对湿度(RH)为95%的细胞培养箱中培养。


表 1  HCerMEC培养材料


参考文献

[1] Danforth D. (1983) “The morphology of the human cervix.” Clin Obstet Gynecol. 26(1):7-13.

[2]Sumpio B, Riley J, Dardik A. (2002) “Cells in focus: endothelial cell.” Int J Biochem Cell Biol. 34(12): 1508-1512.

[3] Neiva K, Warner K, Campos M, Zhang Z, Moren J, Danciu T, Nör J. (2014) “Endothelial cell-derived interleukin-6 regulates tumor growth. BMC Cancer. 14: 1-11.

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