【Lonza】人前列腺上皮细胞（HPrEpiC）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 男性生殖细胞系统 Male Reproductive Cell System Lonza 人前列腺上皮细胞 Prostate Epithelial Cells Basal Medium CC-3166 CC-3165

小白求助前辈指路

人前列腺上皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人前列腺上皮细胞

（HPrEpiC）

前列腺是雄性哺乳动物生殖系统的重要附属器官，其结构和功能活动受雄激素的调控。前列腺由三个区域组成，可以通过细胞角蛋白表达谱来进行鉴定。基底细胞主要表达高分子量的细胞角蛋白（CK5和CK14），腺管分泌细胞主要表达低分子量的细胞角蛋白（CK8和CK18），而中间细胞则同时表达基底和腺管细胞的细胞角蛋白。此外，研究表明基底上皮细胞会分化为腺管上皮细胞。前列腺癌是影响男性最常见的癌症之一，具有较高的发病率和死亡率。HPrEpiC培养为研究前列腺的许多重要特征以及化学和激素致癌过程提供有用工具。

HPrEpiC分离自人前列腺组织，可通过cytokeratin-18和cytokeratin-19的特异性免疫荧光染色进行鉴定。

培养方式

培养基：用提供的完全培养基（包含Basal Medium和其他补充剂）培养。

操作步骤

1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存。

2) T-25中加入5 mL完全培养基。在细胞播种前，在细胞培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中（按2500 cells/cm²的密度），并置于细胞培养箱中培养。

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。

传代：当细胞密度60%~80%时进行传代。

1) 将T/E、HEPES、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用5 ml HEPES清洗细胞后吸除，加入2 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞（2-6 min），用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入4 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并快速转移到15 mL离心管中。用2 ml HEPES收集残余的细胞并转移至离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入2-3 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞并对活细胞计数。按2500 cells/cm²接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HPrEpiC培养材料

参考文献

[1] van Leenders G, Dijkman H, Hulsbergen-van de Kaa C, Ruiter D, Schalken J. (2000) “Demonstration of intermediate cells during human prostate epithelial differentiation in situ and in vitro using triple-staining confocal scanning microscopy.” Lab Invest. 80:1251–1258.

[2] Sherwood ER, Berg LA, Mitchell NJ, McNeal JE, Kozlowski JM, Lee C. (1990) “Differential cytokeratin expression in normal, hyperplastic and malignant epithelial cells from human prostate.” J. Urol. 143:167–171.

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