【ScienCell】人毛发真皮乳头细胞（HHDPC）产品使用攻略
人毛发真皮乳头细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人毛发真皮乳头细胞
（HHDPC）
真皮乳头是来源于真皮间充质的一组高度活跃的细胞。毛乳头位于毛囊的基部，通过诱导毛囊从表皮发育产生毛纤维，在毛发生长周期中起着至关重要的作用。毛发生长受到毛囊细胞上皮-间质相互作用的严密调控，该过程涉及包括BMP和Wnt信号在内的多种分子通路。前期研究表明，毛乳头细胞在长期培养中逐渐丧失毛发诱导能力和增殖能力。培养技术的不断进步将有助于为研究毛发生物学和再生医学中的毛发重建提供更好的模型。
HHDPC分离自人头皮组织，间充质细胞形态，可通过fibronectin和CD105特异性抗体的免疫荧光进行鉴定。
培养方式
培养皿：纤连蛋白（Bovine Plasma Fibronectin, 2 µg/cm2）包被培养瓶。
培养基：HHDPC用提供的MSCM完全培养基（含基础培养基，5% FBS、1% MSCGS、1% P/S）培养。
操作步骤
1) 包被纤连蛋白（2 µg/cm2）培养瓶的准备（T-75培养瓶）：将10 mL无菌的Dulbecco's磷酸盐缓冲盐（DPBS）与150 µL纤连蛋白原液混匀后加入到T-75培养瓶中，将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少2小时）。在铺细胞前将未凝固纤连蛋白溶液吸出（可重复使用2次），加入20 mL完全培养基（T-75培养瓶）。
2) MSCM完全培养基的配制：用移液管将恢复至室温的FBS（#0025）、MSCGS补充剂轻轻摇晃后全部转移到基础培养基中，并用培养基清洗补充管以恢复整个体积，然后摇晃以混匀完全培养基。
3) 吸出未凝固的纤连蛋白溶液，T-75中加入20 mL的完全培养基，将解冻后的细胞小心加入到培养基中，十字交叉法轻柔平晃培养瓶。（注：不建议在解冻后对细胞进行稀释和离心，因为这些与培养物中残留DMSO的作用相比，这些作用对细胞的损伤更大；将HHDPC置于纤连蛋白包被的培养瓶中以促进生长。）
换液：培养开始后16小时内不要干扰培养。次日更换培养液，去除残留的DMSO和未贴壁细胞。之后每三天更换一次培养基，直到培养达到大约70%的密度。一旦培养达到大约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到大约90%的密度。
传代：当细胞密度达到90%时进行传代。
1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm2的密度传代至预先用纤连蛋白包被的培养瓶中。
生长条件：在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 HHDPC培养材料
参考文献
[1] Yang CC, Cotsarelis G. (2010) “Review of hair follicle dermal cells.” J Dermatol Sci. 57: 2-11.
[2] Kishimoto J, Burgeson RE, Morgan BA. (2000) “Wnt signaling maintains the hair-inducing activity of the dermal papilla.” Genes Dev. 14: 1181-5.
[3] Rendl M, Polak L, Fuchs E. (2008) “BMP signaling in dermal papilla cells is required for their hair follicleinductive properties.” Genes Dev. 22: 543-57.
[4] Osada A, Iwabuchi T, Kishimoto J, Hamazaki TS, Okochi H. (2007) “Long-term culture of mouse vibrissa dermal papilla cells and de novo hair follicle induction.” Tissue Eng. 13: 975-82.
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