【ScienCell】人毛发毛囊角质细胞（HHFK）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 毛发细胞系统 Hair Cell System Sciencell 人毛发毛囊角质细胞 Hair Follicular Keratinocytes Keratinocyte Medium 2101

小白求助前辈指路

人毛发毛囊角质细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人毛发毛囊角质细胞

（HHFK）

毛囊是具有自我更新的结构，在整个生命周期中循环并再生，同时也为角质细胞干细胞提供了一个关键的生态位。角质细胞与底层间充质之间的相互作用对于毛囊形态发生和循环至关重要。在毛发生长阶段，几个关键的发育途径参与决定毛囊角质细胞的命运，以及不同细胞层的分化。研究表明，与表皮角质细胞相比，毛囊角质细胞在增殖能力和CD34表达上具有明显的差异。毛囊角质细胞的应用可以促进毛发生物学、毛发疾病治疗和皮肤再生医学等领域的研究和发展。

HHFK分离自人头皮组织，可通过cytokeratin-18特异性抗体免疫荧光染色进行鉴定。

培养方式

培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被培养瓶。

培养基：HHFK用提供的KM完全培养基（包含基础培养基、1% KGS和1% P/S）。

操作步骤

1) 包被PLL（2 μg/cm²）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL 瓶、PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。

2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL KM完全培养基（基础培养基、KGS和P/S按比例混合配制），将解冻后的HHFK加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，将细胞置于PLL涂层培养有助于促进细胞附着。）

换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90%时进行传代。

1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除，加入10 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱，一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入5 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至50 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm²的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HHFK培养材料

参考文献

[1] Ohyama M, Terunuma A, Tock CL, Radonovich MF, Pise-Masison CA, Hopping SB, Brady JN, Udey MC, Vogel JC. (2006) “Characterization and isolation of stem cell-enriched human hair follicle bulge cells.” J Clin Invest. 116:249-60.

[2] Mecklenburg L, Tychsen B, Paus R. (2005) “Learning from nudity: lessons from the nude phenotype.” Exp Dermatol. 14: 797-810.

[3] Trempus CS, Morris RJ, Bortner CD, Cotsarelis G, Faircloth RS, Reece JM, Tennant RW. (2003) “Enrichment for living murine keratinocytes from the hair follicle bulge with the cell surface marker CD34.” J Invest Dermatol. 120:501-11

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