【ScienCell】人毛发内根鞘细胞（HHIRSC）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 毛发细胞系统 Hair Cell System Sciencell 人毛发内根鞘细胞 Hair Inner Root Sheath Cells Mesenchymal Stem Cell Medium

小白求助前辈指路

人毛发内根鞘细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人毛发内根鞘细胞

（HHIRSC）

人类毛囊的内根鞘（IRS）由三个同心细胞层组成：角质层、Huxley层和Henle层。这三个层都是由毛球中的外围基质细胞形成。在哺乳动物表皮进化过程中，IRS的形成使得在皮肤内部产生的毛发能够生理性地伸出。其尺寸和弯曲程度在很大程度上决定了毛发的形状。研究表明，在IRS中的表达的特定的Ⅱ型上皮角蛋白和一种独特的成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor，FGF）在毛发发育中具有重要作用。原代HHIRSC的应用可以促进对毛发生物学和相关疾病的研究，为毛发再生医学的发展提供基础。

培养方式

培养瓶：纤连蛋白（Bovine Plasma Fibronectin, 2 µg/cm²）包被培养瓶。

培养基：HHIRSC在所提供的MSCM完全培养基（含基础培养基，5% FBS、1% MSCGS、1% P/S）中培养。

操作步骤

1) 包被纤连蛋白（2 µg/cm²）培养瓶的准备（T-75培养瓶）：将10 mL无菌的Dulbecco's磷酸盐缓冲盐（DPBS）与150 µL纤连蛋白原液混匀后加入到T-75培养瓶中，将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少2小时）。在铺细胞前将未凝固纤连蛋白溶液吸出（可重复使用2次），加入20 mL完全培养基（T-75培养瓶）。

2) MSCM完全培养基的配制：用移液管将恢复至室温的FBS（#0025）、MSCGS补充剂轻轻摇晃后全部转移到基础培养基中，并用培养基清洗补充管以恢复整个体积，然后摇晃以混匀完全培养基。

3) 吸出未凝固的纤连蛋白溶液，T-75中加入20 mL的完全培养基，将解冻后的细胞小心加入到培养基中，十字交叉法轻柔平晃培养瓶。（注：不建议在解冻后对细胞进行稀释和离心，因为这些与培养物中残留DMSO的作用相比，这些作用对细胞的损伤更大；将HHIRSC置于纤连蛋白包被的培养瓶中，促进生长同样重要。）

换液：培养开始后16小时内不要干扰培养。次日更换培养液，去除残留的DMSO和未贴壁细胞。之后每三天更换一次培养基，直到培养达到大约70%的密度。一旦培养达到大约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到大约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90-95%时进行传代。

1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm²的密度传代至预先用纤连蛋白包被的培养瓶中。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HHIRSC培养材料

参考文献

[1] Stevens A, Lowe J. (1991) “Skin and Breast: Skin Appendages.” In Histology (pp. 356-357). London: Gower Medical Publishing.

[2] Rogers GE. (2004) “Hair follicle differentiation and regulation.” Int J Dev Biol. 48: 163-70.

[3] Langbein L, Rogers MA, Praetzel S, Winter H, Schweizer J. (2003) “K6irs1, K6irs2, K6irs3, and K6irs4 represent the inner-root-sheath-specific type II epithelial keratins of the human hair follicle.” J Invest Dermatol. 120: 512-22.

[4] Nakatake Y, Hoshikawa M, Asaki T, Kassai Y, Itoh N. (2001) “Identification of a novel fibroblast growth factor, FGF-22, preferentially expressed in the inner root sheath of the hair follicle.” Biochim Biophys Acta. 1517: 460-3

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