【ScienCell】人毛发外根鞘细胞（HHORSC）产品使用攻略
人毛发外根鞘细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人毛发外根鞘细胞
（HHORSC）
毛囊的外根鞘（ORS）包绕着毛纤维和内根鞘，由靠近皮肤表面的毛囊开口处的基底层、棘层细胞和颗粒层组成，在毛囊较深处有修饰的富糖原棘层细胞。ORS包含多个细胞群，这些细胞群在毛囊的某些功能中发挥作用，如作为皮肤的感觉器官和免疫哨兵。研究表明，ORS中含有表达nestin的干细胞，并且根据毛发周期，表达nestin的干细胞的位置是可变的。ORS还代表着一种替代的角质细胞来源，适用于皮肤替代。
HHORSC分离自人透皮组织，间充质细胞形态，其fibronectin和CD105特异性抗体的免疫荧光染色呈阳性。
培养方式
培养瓶：纤连蛋白（Bovine Plasma Fibronectin, 2 µg/cm2）包被培养瓶。
培养基：HHORSC在所提供的MSCM完全培养基（含基础培养基，5% FBS、1% MSCGS、1% P/S）中培养。
操作步骤
1) 包被纤连蛋白（2 µg/cm2）培养瓶的准备（T-75培养瓶）：将10 mL无菌的Dulbecco's磷酸盐缓冲盐（DPBS）与150 µL纤连蛋白原液混匀后加入到T-75培养瓶中，将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少2小时）。在铺细胞前将未凝固纤连蛋白溶液吸出（可重复使用2次），加入20 mL完全培养基（T-75培养瓶）。
2) MSCM完全培养基的配制：用移液管将恢复至室温的FBS（#0025）、MSCGS补充剂轻轻摇晃后全部转移到基础培养基中，并用培养基清洗补充管以恢复整个体积，然后摇晃以混匀完全培养基。
3) 吸出未凝固的纤连蛋白溶液，T-75中加入20 mL的完全培养基，将解冻后的细胞小心加入到培养基中，十字交叉法轻柔平晃培养瓶。（注：不建议在解冻后对细胞进行稀释和离心，因为这些与培养物中残留DMSO的作用相比，这些作用对细胞的损伤更大；将HHORSC置于纤连蛋白包被的培养瓶中，促进生长同样重要。）
换液：培养开始后16小时内不要干扰培养。次日更换培养液，去除残留的DMSO和未贴壁细胞。之后每三天更换一次培养基，直到培养达到大约70%的密度。一旦培养达到大约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到大约90%的密度。
传代：当细胞密度达到90-95%时进行传代。
1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm2的密度传代至预先用纤连蛋白包被的培养瓶中。
生长条件
在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 HHORSC培养材料
参考文献
[1] Stevens A, Lowe J. (1991) “Skin and Breast: Skin Appendages.” In Histology (pp. 356-357). London: Gower Medical Publishing.
[2] Paus R, Cotsarelis G. (1999) “The biology of hair follicles.” N Engl J Med. 341: 491-7.
[3] Li L, Mignone J, Yang M, Matic M, Penman S, Enikolopov G, Moffman R. (2003) “Nestin expression in hair follicle sheath progenitor cells.” PNAS. 100: 9958-61.
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