【ScienCell】人口腔角质细胞（HOK）产品使用攻略
人口腔角质细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人口腔角质细胞
（HOK）
口腔角质细胞是物理、微生物和化学试剂的主要屏障，并在应对不同刺激时可能导致局部细胞损伤。它们通过组成性或在各种刺激后产生细胞因子参与促炎过程，并可通过不同白细胞介素，如IL-1β和IL-18等参与控制口腔感染的炎症过程。口腔角质细胞表达多种分化标志物，其表达受钙诱导的靶基因转录变化的影响。HOK具有与真皮角质形成细胞相似的主要结构和功能特征，是研究角质形成细胞基本生物学、永生化和恶性转化过程的优秀模型。
HOK分离自口腔粘膜，其cytokeratin-18和cytokeratin-19的特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。
培养方式
培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。
培养基：HOK用提供的OKM完全培养基（包含基础培养基、1% OKGS和1% P/S）培养。
操作步骤：
1) 包被PLL（2 μg/cm2）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。
2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL OKM完全培养基（基础培养基、OKGS和P/S按比例混合配制），将解冻后的HOK 加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，细胞在PLL包被培养瓶中有助于促进细胞附着。）
换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。
传代：当细胞密度达到95%时进行传代。
1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入10 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入5 mL FBS终止消化，将细胞悬液转移至50 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm2的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。
生长条件：在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 HOK培养材料
参考文献
[1] Lundqvist C, Baranov V, Teglund S, Hammarstrom S, Hammarstrom ML. (1994) “Cytokine profile and ultrastructure of intraepithelial gamma delta T cells in chronically inflamed human gingiva suggest a cytotoxic effector function.” J. Immunol. 153:2302-2312.
[2] Rouabhia M, Ross G, Page N, Chakir J. (2002) “Interleukin-18 and Gamma Interferon Production by Oral Epithelial Cells in Response to Exposure to Candida albicans or Lipopolysaccharide Stimulation.” Infect. Immun. 70:7073-7080.
[3] Presland RB, Dale BA. (2000) “Epithelial structural proteins of the skin and oral cavity: function in health and disease.” Crit. Rev. Oral Biol. Med. 11:383-408.
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