【Lonza】人肺微血管内皮细胞（HPMEC）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 肺细胞系统 Pulmonary Cell System Lonza 人肺微血管内皮细胞 Pulmonary Microvascular Endothelial Cells Basal Medium Microvascular Endothelial Cell Growth Medium CC-3202 CC-3156

小白求助前辈指路

人肺微血管内皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人肺微血管内皮细胞

（HPMEC）

肺微血管内皮细胞（PMEC）衬覆于肺血管系统，形成半选择性屏障，对血液和肺间质之间的气体交换和液体、大分子及细胞的调节至关重要。PMEC产生血管紧张素转换酶和激活肽类激素血管紧张素，引起血管收缩，使血压升高。PMEC在调节肺间质细胞的细胞特性和炎症事件中发挥重要作用。PMEC的功能与急性肺损伤、肺动脉高压、水肿、栓塞和肺癌的发生相关。HPMEC的vWF/Factor VIII和CD31 (PECAM)特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养基：用提供的完全培养基（包含Basal Medium和5% FBS及其他补充剂）培养。

操作步骤

1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存

2) T-25中加入10 mL完全培养基。在细胞播种前，在细胞培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中，并置于细胞培养箱中培养。

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。

传代：当细胞密度70%~90%时进行传代。

1) 将T/E、HEPES、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用HEPES清洗细胞后吸除，加入2.5 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞，用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入5 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并转移到15 mL离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入1 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞。按3500 cells/cm²接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HPMEC培养材料

参考文献

[1] Townsley MI. (2012) “Structure and composition of pulmonary arteries, capillaries, and veins.” Compr Physiol. 2: 675-709.

[2] Studdy PR, Lapworth R, Bird R. (1983) “Angiotensin-converting enzyme and its clinical significance-a review.” J Clin Pathol. 36: 938-47.

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[4] Song Y, Coleman L, Shi J, Beppu H, Sato K, Walsh K, Loscalzo J, Zhang YY. (2008) “Inflammation, endothelial injury, and persistent pulmonary hypertension in heterozygous BMPR2-mutant mice.” Am J Physiol Heart Circ Physiol. 295: H677-90.

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