【PromoCell】人肺动脉平滑肌细胞（HPASMC）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 肺细胞系统 Pulmonary Cell System Promocell 人肺动脉平滑肌细胞 Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells Smooth Muscle Cell Growth Medium Smooth Muscle Cell Basal Medium C-22162 C-22262

小白求助前辈指路

人肺动脉平滑肌细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人肺动脉平滑肌细胞

（HPASMC）

平滑肌细胞（SMC）是动脉疾病发展的主要因素，血管平滑肌细胞转变为增殖表型促进血管疾病进展。肺动脉平滑肌细胞（PASMC）表达VEGF和FGF-2。慢性肺缺氧性疾病引起血管重塑伴PASMC增生，导致肺动脉高压。培养的PASMC在血管疾病研究中发挥重要作用，可用于鉴定治疗肺血管疾病的新治疗靶点。HPASMC的α-smooth muscle actin（α-SMA）特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

Human Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells（# C-12521）分离自人肺动脉。

培养基：用提供的Smooth Muscle Cell Growth Medium 2完全培养基（包含Basal Medium和5% Fetal Calf Serum及其他补充剂）培养。

操作步骤

1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存（4℃下可保存6周）。

2) T-25中加入10 mL Smooth Muscle Cell Growth Medium 2完全培养基。在细胞播种前，在37°C和5%二氧化碳培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中，并置于细胞培养箱中培养

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。

传代：当细胞密度70%~90%时进行传代。

1) 将T/E、HBSS、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用HBSS清洗细胞后吸除，加入2.5 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞，用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入2.5 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并转移到15 mL离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入1 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞。按7,500~1,000 cells/cm²接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HPASMC培养材料

参考文献

[1] Quinn TP, Schlueter M, Soifer SJ, Gutierrez JA. (2002) “Cyclic mechanical stretch induces VEGF and FGF-2 Expression in pulmonary vascular smooth muscle cells.” Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 282: L897-903.

[2] Rose F, Grimminger F, Appel J, Heller M, Pies V, Weissmann N, Fink L, Schmidt S, Krick S, Camenisch G, Gassmann M, Seeger W, Hänze J. (2002) “Hypoxic pulmonary artery fibroblasts trigger proliferation of vascular smooth muscle cells: role of hypoxia-inducible transcription factors.” FASEB J. 12: 1660-1.

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