【Lonza】人小气道上皮细胞（HPSAEpiC）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 肺细胞系统 Pulmonary Cell System Lonza 人小气道上皮细胞 Small Airway Epithelial Cells Small Airway Epithelial Cell Growth Basal Medium CC-3118 CC-3119

小白求助前辈指路

人小气道上皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人小气道上皮细胞

（HPSAEpiC）

气道上皮细胞在气道中形成连续的衬里，作为对外界有害因素的保护性物理和功能屏障，发挥着独特的作用。小气道上皮细胞（SAEpiC)通过趋化因子的产生和黏附分子的表达参与宿主防御，从而调节免疫反应，并产生有助于肺液体平衡的液体。许多气道疾病，如哮喘、毛细支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、囊性纤维化等，都涉及气道表面上皮的损伤。HPSAEpiC的培养研究可有助于确定预防气道疾病的新的治疗方案。HPSAEpiC分离自人肺组织，其cytokeratin-18和cytokeratin-19的特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养基：用提供的完全培养基（包含Basal Medium和其他补充剂）培养。

操作步骤

1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存。

2) T-25中加入5 mL完全培养基。在细胞播种前，在细胞培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中（按2500 cells/cm²的密度），并置于细胞培养箱中培养。

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。

传代：当细胞密度60%~80%时进行传代。

1) 将T/E、HEPES、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用5 ml HEPES清洗细胞后吸除，加入2 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞（2-6 min），用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入4 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并快速转移到15 mL离心管中。用2 ml HEPES收集残余的细胞并转移至离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入2-3 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞并对活细胞计数。按2500 cells/cm²接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HPSAEpiC培养材料

参考文献

[1] Stellato C, Beck LA, Gorgone GA, Proud D, Schall TJ, Ono SJ, Lichtenstein LM, Schleimer RP. (1995)“Expression of the chemokine RANTES by a human bronchial epithelial cell line. Modulation by cytokines and glucocorticoids.” J Immunol. 155: 410–418.

[2] Atsuta J, Sterbinsky SA, Plitt J, Schwiebert LM, Bochner BS, Schleimer RP. (1997) “Phenotyping and cytokine regulation of the BEAS-2B human bronchial epithelial cell: demonstration of inducible expression of the adhesion molecules VCAM-1 and ICAM-1.” Am J Respir Cell Mol Biol. 17: 571–582.

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