【ScienCell】人晶状体上皮细胞(HLEpiC）产品使用攻略
人晶状体上皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人晶状体上皮细胞
(HLEpiC）
哺乳动物的晶状体由两种细胞类型组成，晶状体纤维细胞构成晶状体的主体，而上皮细胞则覆盖在纤维细胞的前表面形成单层。晶状体上皮细胞负责晶状体的稳态调节，包括电解质和液体的运输。在正常发育过程中，晶状体上皮细胞逐渐分化和成熟。随后，晶状体上皮细胞从赤道区域迁移到晶状体内部产生透明的晶状蛋白，伸长形成晶状体纤维细胞，并最终失去其细胞核和其他细胞器。研究表明，晶状体上皮细胞的分化和极化受到眼内液体中存在的生长因子的调节，如表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素生长因子和胰岛素。HLEpiC可通过cytokeratin-18和cytokeratin-19特异性抗体免疫荧光染色鉴定。
培养方式
培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。
培养基：HLEpiC在提供的EpiCM完全培养基（包含基础培养基、2% FBS、1% EpiCGS和1% P/S）中培养。
操作步骤：
1) 包被PLL（2 μg/cm2）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。
2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL EpiCM完全培养基（基础培养基、FBS、EpiCGS和P/S按比例混合配制），将解冻后的HLEpiC加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，细胞在PLL包被培养瓶中有助于促进细胞附着。）
换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。
传代：当细胞密度达到90%时进行传代。
1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入10 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱，一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入5 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至50 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm2的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。
生长条件：在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表1 HLEpiC培养材料
参考文献
[1] Candia OA. (2004) “Electrolyte and fluid transport across corneal, conjunctival and lens epithelia.” Exp Eye Res. 78:527-35.
[2] Wagner LM, Takemoto DJ. (2001) “PKCa and PKC? overexpression causes lentoid body formation in the N/N 1003A rabbit lens epithelial cell line.” Molecular Vision. 7: 138-44.
[3] Lang RA. (1999) “Which factors stimulate lens fiber cell differentiation in vivo?” Invest Opthalmol Vis Sci. 40:3075-8.
[4] Leenders WP, van Genesen ST, Schoenmakers JG, van Zoelen EJ, Lubsen NH. (1997) “Synergism between temporally distinct growth factors: bFGF, insulin and lens cell differentiation.” Mech Dev. 67: 193-201.
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