【ScienCell】人胸腺上皮细胞（HTyEpiC）产品使用攻略
人胸腺上皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人胸腺上皮细胞
（HTyEpiC）
胸腺上皮细胞（TyEpiC）是胸腺细胞发育和T淋巴细胞（T细胞）耐受性的重要调节因子。胸腺包含两种类型的TyEpiC，即皮质和髓质胸腺上皮细胞，它们调节胸腺细胞的阳性选择和自身反应T细胞的阴性选择。胸腺上皮细胞无法在胸腺中清除自身反应T细胞进而可能影响自身耐受性，并促进自身免疫性疾病如重症肌无力、Ι型糖尿病、类风湿性关节炎和多发性硬化的发展。研究表明，肿瘤坏死因子受体家族成员和转录因子Foxn1以及自身免疫调节因子（Aire）的表达变化可以改变胸腺微环境和自身耐受性。人TyEpiC是研究调节TyEpiC功能机制和开发针对自身免疫性疾病的靶向治疗的优秀体外模型。HTyEpiC分离自人的胸腺，其cytokeratin-18和cytokeratin-19的特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。
培养方式
培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。
培养基：HTyEpiC用提供的HTyEpiCM完全培养基（包含基础培养基、1% TyEpiCGS和1% P/S）培养。
操作步骤：
1) 包被PLL（2 μg/cm2）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养容器放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。
2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL完全培养基，将解冻后的HTyEpiC加入至包被的T-75中（种植密度为10000-12000 cells/cm2），十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，细胞在PLL包被培养瓶中有助于促进细胞附着。）
换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，达到90%左右密度后立即用于实验。
表 1 HTyEpiC培养材料
参考文献
[1] Alexandropoulos K, Danzl N. (2012) “Thymic epithelial cells: antigen presenting cells that regulate T-cell repertoire and tolerance development.” Immunol Res. 54(1-3): 177-190.
[2] Danzl N, Jeong S, Choi Y, Alexandropoulos K. (2014) “Identification of novel thymic epithelial cell subsets whose differentiation is regulated by RANKL and Traf6.” PLoS One. 9(1): e86129.
[3] Sun L, Hongran L, Luo H, Zhao Y. (2014) “Thymic epithelial cell development and its dysfunction in human diseases.” Biomed Res Int. 2014: 206929.
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