【ScienCell】人胰腺星状细胞（HPaSteC）产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人胰腺星状细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人胰腺星状细胞

（HPaSteC）

胰星状细胞（HPaSteC）是胰腺的主要成纤维细胞，负责合成和降解促进组织修复的细胞外基质蛋白，位于胰腺腺泡细胞旁，以及小的胰腺小管和血管周围。当HPaSteC被激活时，会呈现肌成纤维细胞样形态，并分泌过多的细胞外基质蛋白，可导致慢性胰腺炎和腺癌的纤维化。研究表明，HPaSteC还可作为祖细胞、免疫细胞和外分泌胰腺分泌的中介物。此外，HPaSteC刺激胰腺癌细胞增殖，抑制凋亡，并促进血管生成，是研究胰腺肿瘤形成的有用工具，可应用于研究开发慢性胰腺炎和腺癌的新疗法。

HPaSteC分离自人的胰腺组织，其α-smooth muscle actin（α-SMA）的特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。

培养基：HPaSteC用提供的SteCM完全培养基（包含基础培养基、2% FBS、1% SteCGS和1% P/S）培养。

操作步骤

1) 包被PLL（2 μg/cm²）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养容器放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。

2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL完全培养基，将解冻后的HPaSteC加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，细胞在PLL包被培养瓶中有助于促进细胞附着。）

换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90-95%时进行传代。

1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入1 mL FBS终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm²的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HPaSteC培养材料

参考文献

[1] Erkan M, Hausmann S, Michalski C, Schlitter M, Fingerle A, Friess H, Kleeff J. (2012). “How fibrosis influences imaging and surgical decision in pancreatic cancer.” Front. Physio. 3:389.

[2] Apte M, Pirola R, Wilson J. (2012) “Pancreatic stellate sells: A starring role in normal and diseased pancreas.”Front. Physio. 3:344.

[3] Mato E, Lucas M, Petriz J, Gomis R, Novials A. (2009) “Identification of a pancreatic stellate cell population with properties of progenitor cells: new role for stellate cells in the pancreas.” Biochem. J. 421:181.

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