【ScienCell】人肾上腺皮质细胞（HAdCC）产品使用攻略
人肾上腺皮质细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人肾上腺皮质细胞
（HAdCC）
肾上腺皮质位于肾上腺的外围，通过分泌皮质类固醇和雄激素来调节身体的稳态。分泌的类固醇激素来自于形成肾上腺的三个区域，这些区域构成了肾上腺皮质的框架。皮质细胞起源于中胚层，并形成三个同心圆的区域：球状带、束状带和网状带。研究表明，肾上腺的皮质区域与髓质区域之间存在广泛的相互作用，皮质细胞位于肾上腺髓质内，嗜铬细胞位于肾上腺皮质内，这两种类型细胞之间的密切接触可进一步研究肾上腺两个区域之间的旁分泌信号传递。肾上腺皮质细胞可应用于研究激素调节和类固醇合成。
HAdCC分离自人的肾上腺皮质组织，其GFAP特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。
HAdCC培养方式
培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被培养瓶。
培养基：HAdCC用提的MSCM完全培养基（包含基础培养基、5% FBS、1% MSCGS和1% P/S）培养。
操作步骤
1) 包被PLL（2 μg/cm2）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。
2) 完全培养基的准备：将MSCM基础培养基与FBS、MSCGS和P/S按比例混合。
3) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL完全培养基，将解冻后的HAdCC加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，细胞在PLL包被培养瓶中有助于促进细胞附着。）
换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。
传代：当细胞密度达到95%时进行传代。
1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除，加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱，一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm2的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。
生长条件
在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 HAdCC培养材料
参考文献
[1] Bornstein SR, Gonzalez-Hernandez JA, Ehrhart-Bornstein M, Adler G, Scherbaum WA. (1994) “Intimate contact of chromaffin and cortical cells within the human adrenal gland forms the cellular basis for important intraadrenal interactions.” J Clin Endocrinol Metab. 78(1): 225-32.
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