【ScienCell】人肾上腺成纤维细胞（HAdF）产品使用攻略

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人肾上腺成纤维细胞 HAdF 人原代细胞 Human Primary cells 内分泌细胞系统 Endocrine Cell System Sciencell Adrenal Fibroblasts Fibroblast Medium 2301

小白求助前辈指路

人肾上腺成纤维细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人肾上腺成纤维细胞

（HAdF）

肾上腺通过分泌皮质类固醇和雄激素，在身体稳态调节中起重要作用。成纤维细胞负责在结缔组织中合成大部分细胞外基质，包括分泌I型和III型胶原，并在伤口愈合中起着核心作用。由于成纤维细胞的直接参与或其他细胞类型受损伤时伴随纤维化的产生，因此与众多疾病的发展相关，例如，由成纤维细胞极度增殖和细胞外基质扩张所导致的克罗恩病患者肠道狭窄的发展。HAdF提取自人肾上腺组织，其fibronectin特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

HAdF培养方式

培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。

培养基：HAdF用提供的FM完全培养基（含基础培养基，2% FBS，1%FGS，1%P/S）培养。

操作步骤

1) 包被PLL (2 μg/cm²）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。

2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL FM完全培养基（基础培养基、FBS、FGS和P/S按比例混合配制），将解冻后的HAdF加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，细胞在PLL包被培养瓶中有助于促进细胞附着。）

换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90%时进行传代。

1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm²的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HAdF培养材料

参考文献

[1] Conrad GW, Hart GW, Chen Y. (1977) “Differences in vitro between fibroblast-like cells from cornea, heart, and skin of embryonic chicks.” J Cell Sci. 26: 119-37.

[2] Gabbiani G, Rungger-Brandle E. (1981) “The fibroblast.” In Glynn LE, Handbook of Inflammation, Vol. 3: Tissue Repair and Regeneration (pp. 1-50) Amsterdam: Elsevier.

[3] Luna J, Masamunt MC, Rickmann M, Mora R, Espana C, Delgado S, Llach, J, Vaquero E, Sans M. (2011) “Rocotrienols have potent antifibrogenic effects in human intestinal fibroblasts.” Inflamm Bowel Dis. 17: 732-41.

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