【ScienCell】HPA分化为Mature adipocytes及维持方法
人前体脂肪细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人前体脂肪细胞
（HPA）
脂肪细胞在能量储存和代谢中起着重要作用。脂肪细胞分化是一个对代谢稳态和营养信号传导至关重要的发育过程，受到基因表达和信号转导等复杂作用的调控。脂肪组织中的前脂肪细胞在成年期始终存在，并且可增殖和分化为成熟的脂肪细胞，从而增加脂肪组织的质量。体外研究表明，不同组织来源的前脂肪细胞在脂质积累、脂肪生成转录因子表达和TNFα诱导的凋亡方面存在差异。脂肪细胞分化与众多生理和病理过程密切相关，包括脂肪代谢、肥胖、糖尿病、高脂血症和乳腺癌。HPA分离自内脏脂肪或皮下脂肪组织，其CD44和CD90免疫荧光染色呈阳性，且分化后脂质染色呈阳性。
培养方式
Preadipocyte Medium (PAM, Cat. #7211)用于体外培养HPA-v。Preadipocyte Differentiation Medium (PADM, Cat. #7221)用于将前体脂肪细胞体外分化为成熟的脂肪细胞，随后使用Adipocyte Medium (AdM, Cat. #7201)来维持分化后的成熟脂肪细胞。
HPA的分化及维持方式
培养瓶或培养板：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被培养瓶或培养板。
分化培养基：HPA用提供的PADM诱导分化完全培养基（包含基础培养基、5% FBS、1% PAdDS和1% P/S）培养。
操作步骤：
1) 在PLL包被培养瓶或培养板中以每平方厘米10000 cells/cm2细胞的密度培养HPA细胞悬浮液。
2) 在37°C、5% CO2的湿度控制培养箱中孵育细胞1-2天。
注意：在开始前体脂肪细胞诱导前，细胞应达到100%的密度。
3) PADM完全培养基的准备：将PAMD基础培养基、5% FBS、1% PAdDS和1% P/S按一定的比例混合
4) 当细胞达到100%的密度时，小心地用前体脂肪细胞分化培养基（PADM，Cat. No.7221）替换PAM。此次培养基更换记为分化的第1天。
5) 每2-3天更换新鲜的PADM完全培养基。
6) 至5-12天时，分化为成熟脂肪细胞的过程完成。可以用油红O溶液固定和染色对成熟脂肪细胞进行染色。
7) 分化成熟的脂肪细胞可以在脂肪细胞AdM完全培养基（包含AdM基础培养基、2.5% FBS、1% AdGS和1% P/S）中维持最多6天。
表1 HPA诱导分化培养材料
表2 Mature adipocytes培养材料
参考文献
[1] Tominaga K, Johmura Y, Nishizuka M, Imagawa M. (2004) “Fad24, a mammalian homolog of Noc3p, is a positive regulator in adipocyte differentiation.” J Cell Sci. 117(Pt 25):6217-26.
[2] Reue K, Glueck SB. (2001) “Accumulating evidence for differences during preadipocyte development: Focus on differential gene expression in white and brown preadipocytes.” Physiol Genomics. 7(1):1-2.
[3] Tchkonia T, Tchoukalova YD, Giorgadze N, Pirtskhalava T, Karagiannides I, Forse RA, Koo A, Stevenson M, Chinnappan D, Cartwright A, Jensen MD, Kirkland JL. (2005) “Abundance of Two Human Preadipocyte Subtypes with Distinct Capacities for Replication, Adipogenesis, and Apoptosis Varies among Fat Depots.” Am J Physiol Endocrinol Metab.
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