【PromoCell】人心脏成纤维细胞（HCF）产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人心脏成纤维细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人心脏成纤维细胞

（HCF）

心脏成纤维细胞（CF）为心肌提供结构支持，并在生长和病理生理条件下负责心脏的胞外基质合成。CF是心肌应对损伤的重要细胞组分，也是旁分泌生长因子的来源。CF的过度增殖及分泌细胞外基质促进心肌梗死和心脏纤维化部位瘢痕的形成。CF的培养已被广泛作为研究心脏基质在生理（运动）和病理（高血压）应激因素下重塑的模型。HCF的fibronectin特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养条件

Human Cardiac Fibroblasts（# C-12375）分离成人心脏组织。

培养基：用提供的Fibroblast Growth Medium 3完全培养基（包含Basal Medium和10% Fetal Calf Serum及其他补充剂）培养。

操作步骤：

1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存（4℃下可保存6周）。

2) T-25中加入10 mL Fibroblast Growth Medium 3完全培养基。在细胞播种前，在37°C和5%二氧化碳培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中，并置于细胞培养箱中培养

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。

传代：当细胞密度70%~90%时进行传代。

1)将T/E、HBSS、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2)弃除旧培养基，并用HBSS清洗细胞后吸除，加入2.5 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞，用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入2.5 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并转移到15 mL离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入1 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞。按3,500~7,000 cells/cm²接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表1 HCF培养材料