【Lonza】人主动脉内皮细胞（ HAEC）产品使用攻略

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人主动脉内皮细胞 HAEC 细胞产品人原代细胞 Human Primary cells 心脏细胞系统 Cardiac Cell System Lonza Aortic Endothelial Cells Basal Medium Endothelial Cell Growth Medium CC-3162 CC-3156

小白求助前辈指路

人主动脉内皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人主动脉内皮细胞

(HAEC)

主动脉是人体中最大的动脉，将富含氧的血液从心脏分配到全身各个部位。主动脉内皮细胞（AEC）位于血管壁内，不断受到高血流剪切应力的作用，诱导内皮源性物质的产生，调节血管收缩和血管生长。AEC还调节细胞粘附分子的表达，以控制和微调炎症反应和纤溶作用。这些生理特性使得AEC培养在研究内皮功能障碍机制、血管疾病和动脉粥样硬化的发病机制以及新型疾病治疗的发展中得到广泛应用。HAEC的vWF/Factor VIII和CD31 (PECAM1)特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养基：用提供的完全培养基（包含Basal Medium和2%FBS及其他补充剂）培养。

操作步骤：

1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存。

2) T-25中加入10 mL完全培养基。在细胞播种前，在细胞培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中，并置于细胞培养箱中培养。

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。

传代：当细胞密度70%~90%时进行传代。

1) 将T/E、HEPES、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2)弃除旧培养基，并用HEPES清洗细胞后吸除，加入2.5 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞，用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入5 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并转移到15 mL离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入1 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞。按2500 cells/cm²接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表1 HAEC培养材料

参考文献

[1] Ando J, Kamiya A. (1996) “Flow-dependent regulation of gene expression in vascular endothelial cells.” Heart J. 37: 19-32.

[2]Cines DB, Pollak ES, Buck CA, Loscalzo J, Zimmerman GA, McEver RP, Pober JS, Wick TM, Konkle BA, Schwartz BS, Barnathan ES, McCrae KR, Hug BA, Schmidt AM, Stern DM. (1998) “Endothelial cells in physiology and in the pathophysiology of vascular disorders.” Blood. 91: 3527-61.

[3]Liu JW, Wei DZ, Du CB, Zhong JJ. (2003) “Enhancement of fibrinolytic activity of bovine aortic endothelial cells by ginsenoside Rb2.” Acta Pharmacol Sin. 24: 102-8.

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