【ScienCell】人心肌细胞（HCM）产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人心肌细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人心肌细胞

（HCM）

心肌细胞是身体中最具有活力的细胞，是具有高氧含量的高度专业化细胞，拥有大量的线粒体，占据心脏质量的75％，但仅占心脏总细胞数的三分之一左右。分化的心肌细胞几乎没有增殖能力；然而，α1-肾上腺素通过Ras/MEK途径可刺激心肌细胞的肥大生长。所有心肌细胞都能够自发地产生节律性的膜去极化和复极化。心肌细胞内存在着一个复杂的信号网络，调节着心脏的节律性收缩。心肌细胞肥大和凋亡被认为是心力衰竭期间收缩功能丧失的原因。HCM的培养，有助于对心脏信号网络有更好的理解，并有助于揭示调节心肌细胞死亡的细胞机制。HCM的sarcomeric α-actinin特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

解冻人心肌细胞之前，实验应充分组织好，解冻后尽快用于实验。心肌细胞因无法增殖，无法进行传代培养。

培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。

培养基：HCM用提供的CMM-sf完全培养基（包括基础培养基、1% CMGS-sf和1% P/S）。

操作步骤：

1) 包被PLL（2 μg/cm²）培养瓶（T-25培养瓶）的准备：将5 mL无菌水加入到T-25培养瓶中，加入5 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。

2) 无菌水清洗包被PLL的T-25 2次，加入10 mL完全培养基，将解冻后的HCM加入至包被的T-25中（细胞密度为1~2 × 10⁴ cells/cm²），十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，将细胞置于PLL涂层培养有助于促进细胞附着。）

换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表1 HCM培养材料

参考文献

[1] Bodyak N, Kang PM, Hiromura M, Sulijoadikusumo I, Horikoshi N, Khrapko K, Usheva A. (2002) “Gene expression profiling of the aging mouse cardiac myocytes.” Nucleic Acids Research. 30: 3788-94.

[2] Tamamori-Adachi M, Ito H, Nobori K, Hayashida K, Kawauchi J, Adachi S, Ikeda MA, Kitajima S. (2002) “Expression of cyclin D1 and CDK4 causes hypertrophic growth of cardiomyocytes in culture: a possible implication for cardiac hypertrophy.” Biochem Biophys Res Commun. 296: 274-80.

[3] Sambrano GR, Fraser I, Han H, Ni Y, O'Connell T, Yan Z, Stull JT. (2002) “Navigating the signaling network in mouse cardiac myocytes.” Nature. 420: 712-4.

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