【ScienCell】人神经元（HN）产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人神经元培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人神经元

（HN）

中枢神经系统的组织由两类细胞组成，可广义地分为神经元和神经胶质细胞。神经元是大脑的结构、功能和营养单位，是高度复杂通信网络的关键组成部分。神经元是动态极化的细胞，是神经系统的主要信号传递单元。人脑中大约有1 x 10¹¹个神经元，每个神经元能够与至少1 x 10⁴个其他神经元进行联系。HN的 β-tubulin III特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

HN从人脑中分离获取，在解冻HN细胞之前，实验应被安排好，并尽快用于实验。HN细胞无法增殖，因此不能进行传代。

培养板：PLL包被的培养板（6 well、12 well或24 well plate）。

培养基：HN用提供的NM完全培养基（包含基础培养基，1% NGS和1%P/S）培养。

操作步骤：

1) 包被PLL（2 μg/cm²）培养板的准备（如6 孔板）：6孔板的一个孔加入2 mL无菌水和20 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。

2) 完全培养基的准备：将添加物按比例加入到基础培养基中。

3) 将解冻后的HN吸至配好的适当的完全培养基中（3 mL/孔），轻轻翻转试管1-2次，以获得培养基中的均质细胞悬浮液（不建议通过上下吹打来重悬原代神经元）。

4) 将细胞悬液按3 mL/孔的量加入至6孔板中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，将细胞置于PLL涂层培养有助于促进细胞附着。）

换液：为了获得最佳结果，在细胞培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜（DMSO）和未附着的细胞，之后每隔一天更换培养基。细胞可能需要几天的时间才能在培养物中生长出神经突起。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表1 HN培养材料