【ScienCell】人脑蛛网膜毛细血管周细胞（HLP）产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人脑蛛网膜毛细血管周细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人脑蛛网膜毛细血管周细胞

（HLP）

中枢神经系统的毛细血管周细胞是与毛细血管和其他小血管内皮紧密相关的周细胞。位于内皮细胞附近的毛细血管周细胞通过延伸长的胞质突起与其他细胞进行通信，并环绕着毛细血管。毛细血管周细胞参与多种过程，包括血管生成、内皮细胞存活、毛细血管血流调节以及构建和维护血脑屏障。毛细血管周细胞的失调与多种病理条件相关，如高血压、糖尿病视网膜病变、动脉粥样硬化、多发性硬化症、阿尔茨海默病和肿瘤血管生成。毛细血管周细胞的独特和多样的功能使其成为再生医学中的细胞治疗的新候选者。脑蛛网膜毛细血管周细胞（LP）来源于包围脑的蛛网膜层。培养的人脑蛛网膜毛细血管周细胞（HLP）是研究多种中枢神经系统疾病的有用体外模型。HLP的α-smooth muscle actin(α-SMA)、platelet derived growth factor receptor-β (PDGFR-β)和NG2的特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被培养瓶。

培养基：HLP用提供的完全培养基（包含完全培养基、2% FBS、1% PGS和1% P/S）培养。

操作步骤：

1) 包被PLL（2 μg/cm²）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。

2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL完全培养基，将解冻后的HLP加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，细胞在PLL涂层的培养瓶中有助于促进细胞附着。）

换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90%-95%时进行传代。

1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除，加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱，一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm²的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表1 HLP培养材料

参考文献

[1] Dore-Duffy P, Cleary K. (2011) “Morphology and properties of pericytes.” Methods Mol Biol. 686:49-68.

[2] Allt G, Lawrenson JG. (2001) “Pericytes: cell biology and pathology.” Cells Tissues Organs. 169: 1-11.

[3] Daneman R, Zhou L, Kebede A, Barres B. (2010) “Pericytes are required for blood-brain barrier integrity during embryogenesis.” Nature. 468:562-566.

[4] Kutcher M, Herman I. (2009) “The pericyte: cellular regulator of microvascular blood flow.” Microvasc Res. 77: 235-246.

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